通过测定酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和复合蛋白酶5种酶中,筛选出木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为酶解鲢制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的理想水解酶;用正交试验L9(34)对两种酶的水解条件进行了优化,并对最佳酶解条件下得到的酶解物进行Sephadex G-25凝胶柱分离,洗脱液分别在波长280nm处比色,测定酶解物中主要抗氧化活性肽的分子量分布.结果表明,木瓜蛋白酶在温度50℃、酶解时间15min、pH=6.5、酶质量分数1.50%、底物∶水=1∶2的水解条件下,酶解物对羟自由基清除效果较好, 清除率为88.2%;胰蛋白酶在温度55℃、酶解时间60min、pH=8.0、酶质量分数0.25%、底物∶水=1∶2的水解条件下,酶解物对羟自由基清除效果较好, 清除率为84.2%.木瓜蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时有最大羟自由基清除率峰,清除率为95.1%,在最大峰处酶解物中活性肽的分子量为2.2kDa;胰蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时也有最大羟自由基清除率峰,其清除率为89.6%,该峰处活性肽的分子量为14.2kDa.