摘要:

摘要:为探讨硒对铜胁迫下大菱鲆幼鱼生长、抗氧化能力及相关基因表达的影响，以初始体质量为（24.85±0.10） g的大菱鲆为研究对象，通过在饲料中添加五水硫酸铜和亚硒酸钠，配制铜、硒含量分别为（0、0，1 000、0，1 000、2，1 000、4 mg/kg） 4种等氮等能的实验饲料，命名为D1、D2、D3和D4组。养殖实验持续84 d。结果显示：①各组间实验鱼成活率无显著差异；增重率、特定生长率和蛋白质效率均在D2组显著低于D1、D3和D4组；摄食率和饲料系数呈相反趋势，在D2组显著高于其他3组。②幼鱼全鱼和肝脏粗脂肪含量呈先下降后上升趋势；而背肌粗蛋白和粗脂肪含量在各组之间无显著性差异。全鱼、脊椎骨和肝脏中Cu含量在D2组达到最高值；Zn含量则在D4组达到最高值；肝脏中铁含量呈下降趋势，在D3和D4组显著低于D1和D2组。③D2组显著降低了幼鱼血清总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性；丙二醛（MDA）含量则呈相反趋势，在D2组显著高于D3和D4组；总超氧化物歧化酶（T-SOD）和铜—锌超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）活性均在D4组达到最低值。④血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性均在D2组显著高于其他3组；而血糖浓度、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）活性均在D2组达到最低值，显著低于D1组。⑤肝脏金属硫蛋白（MT） mRNA相对表达量在D4组达到最高值，显著高于其他3组；谷胱甘肽转移酶（GST）和溶菌酶（LZM） mRNA相对表达量均在D2组显著低于其他3组；热休克蛋白70 （HSP70） mRNA相对表达量则在D2组显著高于其他3组。综上所述，在本实验条件下，饲料中添加硒（2~4 mg/kg）可缓解高铜（1 000 mg/kg）胁迫导致的鱼体生长缓慢等症状，并可调控鱼体的抗氧化能力、生理代谢及相关基因表达量，进而对鱼体在高铜胁迫下的内环境稳态恢复具有一定的促进作用。

摘要:为了研究饲料中添加茶多酚对大菱鲆生长、抗氧化能力及脂肪代谢相关基因表达的影响，以初始体质量为（13.51+0.31） g的大菱鲆幼鱼为实验对象，设计4组添加不同梯度茶多酚（0%、0.01%、0.02%和0.05%，干重添加量分别为0、100、200和500 mg/kg）的等氮等脂实验饲料，进行为期70 d的摄食生长实验。结果显示：①与对照组相比，饲料中添加0.01%~0.02%茶多酚显著提高了大菱鲆幼鱼增重率（WGR）；饲料效率（FE）随饲料中茶多酚添加水平升高而升高，但各组间差异不显著；随饲料中茶多酚添加水平升高，大菱鲆肝体比（HSI）呈降低趋势，且显著低于对照组；②鱼体组成分析表明，投喂添加茶多酚饲料组大菱鲆鱼体和肝脏粗脂肪含量呈下降趋势，且在茶多酚添加水平为0.02%~0.05%时达到最低值，显著低于对照组；③与对照组相比，投喂添加茶多酚饲料组大菱鲆血清总抗氧化能力（T-AOC）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著升高，且各添加组间差异不显著；超氧化物歧化酶（SOD）活性随茶多酚的添加水平升高呈先升高后降低趋势，且在添加水平为0.02%时显著高于对照组； 血清丙二醛（MDA）含量随茶多酚添加水平升高而降低，且在添加水平为0.02%~0.05%时显著低于对照组；④大菱鲆肝脏固醇调节元件结合蛋白 1（SREBP-1）表达量随着饲料中茶多酚添加水平升高而降低，且在添加水平为0.02%~0.05%时达到最低值，显著低于对照组；脂肪酸合成酶（FAS）表达量随茶多酚添加水平的升高呈先降低后升高趋势，且在添加水平为0.02%时显著低于对照组；过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR α）表达量变化趋势与FAS相反，且在添加水平为0.02%时达到最高值。肉毒碱棕榈酰转移酶1（CPT1）表达量随饲料中茶多酚添加水平升高而升高，显著高于对照组，且各添加组间差异不显著。研究表明，高脂饲料中添加茶多酚能促进大菱鲆生长、降低肝脏脂肪过度沉积并提高血清抗氧化能力，高脂饲料中添加0.02%茶多酚是大菱鲆幼鱼生长的最适添加量。

摘要:测定了7种海水鱼的基本营养成分、氨基酸组成及矿物元素含量，并对氨基酸进行营养评价，同时结合营养素安全摄入上限法（UL）对鱼肌肉中矿物元素进行了营养健康风险分析。结果显示，7种海水鱼粗灰分含量差异不大，粗脂肪和水分含量均差异显著，黄花鱼粗脂肪含量最高，含水量最低，分别为9.44%±0.29%和71.64%±0.44%，青点鹦嘴鱼含水量最高，粗脂肪含量最低，粗蛋白含量为18.56%±0.29%~20.97%±0.32%，差异显著；7种海水鱼肌肉中氨基酸种类齐全，含量丰富，且∑EAA/∑TAA和∑EAA/∑NEAA的比值符合FAO/WHO理想模式，限制氨基酸为Val、Trp、Met+Cys，必需氨基酸指数为77.57~89.04；7种海水鱼肌肉中矿物元素含量丰富，且不同鱼种同一元素含量差异显著，K平均含量最大，Na含量差异最为显著；矿物元素的风险评估显示，珠海采样的鱼类Cu在2~5、6~17、18~44、45~59这4个年龄阶段最大风险指数都大于100%，属于风险不可接受范围，平均风险指数均在可接受范围内。本研究以期为海水鱼深加工以及居民日常膳食提供参考。

摘要:C型凝集素（C-type lectin）是一类能与糖类结合的非抗体的蛋白质或糖蛋白家族，为了研究C型凝集素基因在日本沼虾组织分布、细胞定位和细菌感染过程中的表达情况，本研究应用cDNA末端快速克隆（rapid-amplification of cDNA ends，RACE）技术首次克隆了日本沼虾C型凝集素结构域家族3基因（MnLec3）的全长序列，通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR）分析MnLec3基因在不同组织、细菌感染后不同时间的表达水平，Western blot和免疫荧光分别分析蛋白的表达水平和细胞定位。结果显示，MnLec3基因cDNA全长1 357 bp，包括125 bp的5'末端非翻译区（UTR）、1 026 bp的开放阅读框（ORF）和206 bp的3'UTR，其中开放阅读框编码341个氨基酸。氨基酸序列比对显示，日本沼虾MnLec3基因含有保守钙结合点（Met 1-Glu17）和糖识别结构域（CRD）。同源性分析结果显示，MnLec3与罗氏沼虾C型凝集素3相似度较高；邻接法（Neighbor-Joining，NJ）进化树分析结果显示，MnLec3与其他甲壳动物C型凝集素聚为一支。通过构建原核表达载体获得体外重组蛋白rMnLec3，并将纯化重组蛋白免疫大鼠获得抗血清，免疫荧光结果显示，绿色荧光信号主要在肝胰腺细胞核中表达。qRT-PCR结果显示，MnLec3在日本沼虾所检测组织中均表达，其中肝胰腺中表达量最高，血细胞次之；与对照组相比，在嗜水气单胞菌刺激12~48 h时MnLec3表达量显著升高，48 h表达量最高，Western blot分析结果显示，MnLec3蛋白表达丰度与基因表达模式基本相似，提示克隆得到的MnLec3参与日本沼虾抵御细菌入侵的免疫过程。

摘要:本研究选用水煮、油炸和红烧3种烹饪方式分别处理凡纳滨对虾，并且对烹饪后的虾肉进行体外模拟唾—胃—肠液连续消化，以调查烹饪处理后过敏原原肌球蛋白的免疫活性变化状况。采用电泳、免疫印迹和间接ELISA方法评价样品中主要过敏原原肌球蛋白的变化情况。SDS-PAGE结果显示，3种烹饪处理虾肉样品中TM条带无明显变化，表明TM在烹饪处理时基本不发生降解；免疫印迹和间接ELISA结果显示，水煮、油炸和红烧3种烹饪处理虾肉中TM免疫活性分别降低2.08%、11.33%、15.56%；而烹饪后虾肉的体外模拟消化产物的免疫活性丢失显著，水煮、油炸和红烧处理的免疫活性分别下降86.90%、88.94%、97.39%。研究表明，虾类TM免疫活性的降低主要发生在肠液消化阶段，3种方式烹饪处理能够使TM免疫活性降低，并且红烧处理可明显降低TM的免疫活性。本实验为过敏原消减机制的研究和低致敏性水产品的开发提供了理论依据。

摘要:精子发生是指由精原细胞发育为成熟精子的过程。在大多数的物种中，此过程涉及到与DNA结合的碱性蛋白的变化。体细胞类型的组蛋白全部或者部分被过渡蛋白替代，随后又被碱性更强的鱼精蛋白替代，伴随蛋白的逐级替换，此类动物精子核为浓缩的，染色质包装紧密。中华绒螯蟹的精子染色质呈松散的结构，其具体机制尚不明确。本实验利用PCR技术克隆了中华绒螯蟹组蛋白H2A基因的编码区，制备了其多克隆抗体，通过免疫荧光检测了组蛋白H2A在精子发生中的变化特征。结果显示，中华绒螯蟹组蛋白H2A基因编码区为369 bp，编码123个氨基酸，预测蛋白分子量为13.1 ku。氨基酸序列比对发现，H2A与凡纳滨对虾和斑节对虾的同源性极高，均为99.19%。免疫荧光显示，H2A存在于中华绒螯蟹精子发生的整个过程，精原细胞和精母细胞的H2A在细胞核和细胞质均有表达，在精细胞和成熟的精子中的H2A主要存在于细胞核。中华绒螯蟹成熟精子核内组蛋白H2A的保留可能与其非浓缩核有一定关联。

摘要:采用熔融共混法制备高密度聚乙烯（HDPE）/淀粉复合材料，研究了淀粉含量（w_淀粉）对HDPE/淀粉复合材料的流变性、微观结构、热性能、力学性能与动态力学性能的影响。结果显示，淀粉含量为20 wt%时淀粉在HDPE基体中呈微米级均匀分布，淀粉含量增加到30 wt%和50 wt%时呈球状聚集体，其平均粒径从0.6 μm增加到0.8 μm。随淀粉含量增加，HDPE/淀粉复合材料的断裂强力和断裂伸长率显著降低。不同淀粉含量的HDPE/淀粉复合材料均被检测到3个转变峰。HDPE低温下的γ转变峰对应为聚乙烯的玻璃化转变峰，对应于非晶态链段的运动，淀粉含量对γ转变峰影响不大。纯HDPE不存在β峰，β转变与淀粉分散相有关，随淀粉含量增加，复合材料的β峰变宽。高温区出现的α转变与聚乙烯结晶区附近受限链段的运动有关，是一个复杂的多重松弛过程。研究表明，引入一定含量的淀粉可以改善HDPE的加工流变性和韧性，为制备高性能可降解淀粉基渔用材料提供了理论和技术支撑。

摘要:钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ （CaMKⅣ）是一种广泛存在于真核生物中的调控因子，在生物体内具有多种生理功能。为了探究瘤背石磺中CaMKⅣ的作用和分子机制，为进一步阐述CaMKⅣ的生理功能提供科学的理论依据。本实验以瘤背石磺神经节为实验材料，利用RACE-PCR技术克隆得到CaMKⅣ基因的cDNA序列，并进行生物信息学分析和qRT-PCR实验。结果显示，瘤背石磺CaMKⅣ基因的cDNA全长1 603 bp，开放阅读框为1 032 bp，5'非编码区315 bp，3'非编码区256 bp，共编码343个氨基酸；预测该基因编码的多肽链原子数量是5 490，分子量约为3.87 ku，理论等电点6.12，分子式为C₁₇₄₁H₂₇₆₈N₄₅₂O₅₁₄S₁₅，N端信号肽由1~29个氨基酸组成。氨基酸序列比对及系统进化树结果显示，瘤背石磺CaMKⅣ基因与加州海兔、光滑双脐螺CaMKⅣ基因的亲缘关系最为接近，其系统进化分析与传统的形态学分类相吻合。荧光定量PCR结果显示，CaMKⅣ基因在各个组织均有表达，其中在腹足的相对表达量最高，其次是背部皮肤、口器，而在神经节组织、蛋白腺、肠、肝胰腺等脏器组织的相对表达量较低，初步推测，该基因在瘤背石磺的神经调节中发挥重要作用，或为生物机体感知外界环境变量因素的分子基础。本实验为今后进一步了解瘤背石磺神经结构生理功能的调节以及与CaMKⅣ基因功能研究奠定理论支撑，也为探究海洋动物由海洋向陆地进化过程中对环境的适应机制提供参考。

摘要:为理解髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88， MyD88）基因的生物学特性以及对细菌胁迫的响应，本研究克隆了厚壳贻贝MyD88基因（命名为McMyD88-4）cDNA全长序列，其全长3 930 bp，开放阅读框2 607 bp，编码868个氨基酸。其中，13~109位的氨基酸序列为死亡结构域（death domain，DD），347~481位的氨基酸序列为TIR（toll/interleukin-1 receptor）结构域，TIR结构域包含3个高度保守的区域Box 1、Box 2和Box3；McMyD88-4蛋白的空间结构包含6个α螺旋（α-helix）和4个β折叠（β-sheet）。同源性分析显示，McMyD88-4蛋白序列与长牡蛎MyD88最相似，其一致性和相似性分别为60 %和77 %；其次，与虾夷扇贝、海湾扇贝和菲律宾蛤仔相似度较高，其一致性和相似性分别为40%~51%和58%~67%。系统进化树结果显示，McMyD88-4先与长牡蛎和扇贝聚为一支，然后与黑腹果蝇聚为一支，脊椎动物单独聚为一支。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测发现，McMyD88-4基因在厚壳贻贝各组织和器官中均有表达，其中在外套膜和鳃中的表达量最高，而血细胞中表达量最低。厚壳贻贝经沙氏弧菌感染后，McMyD88-4基因表达量在免疫相关组织中急剧上升，分别在感染后3和6 h达到峰值，且在消化腺中的上调水平显著高于鳃和外套膜。研究表明，McMyD88-4在厚壳贻贝抵御外界病原体侵染过程中，尤其是弧菌感染方面发挥重要作用。

摘要:研究和开发利用大洋性生物资源是实现我国海洋渔业可持续发展的重大战略需求，西北太平洋秋刀鱼是近年来我国重点开发的大洋性渔业资源之一，因此利用卫星来监测渔船时空分布动态成为了解秋刀鱼渔业资源变动的重要数据源。本研究采用峰值检测和阈值分割等方法对西北太平洋夜间灯光数据进行识别，利用地理信息系统技术对渔船位置信息和数量进行提取分析。通过西北太平洋秋刀鱼资源调查的渔捞日志和经过筛选的北太平洋渔业委员会（NPFC）渔船列表数据对识别结果进行验证。结果显示，本研究所用的夜间灯光渔船识别方法可以精确识别西北太平洋密集作业及外围分散作业的秋刀鱼渔船。以此为基础可以有效地分析秋刀鱼渔场的时空变动。结合美国国家海洋和大气管理局（NOAA）提供的海表温度（SST）数据绘制等温线，进一步分析作业渔场的时空变化，发现夜间灯光渔船作业的温度范围随着秋刀鱼洄游而变化。2016年7—9月渔场的SST波动较大是因为这一时期秋刀鱼在黑潮—亲潮广泛的交汇区域洄游，分布更为广泛，9月之后作业渔场SST变动趋于稳定。该研究结果将来会对远洋渔场环境实时变化、鱼群分布预测、渔船动态及法律支撑等提供有效信息。

摘要:根据2015和2016年春季灯光罩网渔船分别在南海南部和北部海域作业的鸢乌贼产量数据，研究作业条件水深、时间和月相与单位捕捞努力量渔获量（CPUE）的关系。GAM模型分析，作业时间和农历日对CPUE的影响显著。结果显示，月光天时，0~999 m水深范围CPUE较低；月黑天时，各水层CPUE变化不大，2 500~2 999 m水深范围CPUE较高；作业时间在上半夜 （21：00—23：00），CPUE较高，最高达399.4 kg/网，下半夜 （0：00—5：00） CPUE逐渐下降；月光天和月黑天产量差别较大，分别为267.0和321.6 kg/网；厄尔尼诺现象在一定程度上影响了鸢乌贼资源量在各水层的变化。各作业条件对鸢乌贼CPUE影响的研究能够为渔场的寻找提供参考。

摘要:根据半滑舌鳎lepa和lepb编码氨基酸序列合成开放阅读框ORF肽段。利用原核表达载体pEQ30成功构建了半滑舌鳎lepa/pQE30和lepb/pQE30重组质粒，分别转化至大肠杆菌M15后，经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白。获得的重组蛋白大小均为16 ku，37 ℃下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后目的蛋白表达量最高，主要以包涵体形式存在。检测半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白浓度分别为0.3和0.25 mg/mL。Western blot免疫印迹和质谱分析表明，获得的LepA和LepB重组蛋白均具有免疫活性且序列正确。Ni²⁺-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白。离体孵育实验表明，获得的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白能显著抑制半滑舌鳎下丘脑lepa、lepb和gnrh3 mRNA的表达水平，表明获得的重组蛋白具有明显的生物活性。研究结果可为探究leptin在半滑舌鳎生长发育中的调控机制提供重要参考。

摘要:为研究黄芩素对草鱼生长性能、血清抗氧化能力和肌肉品质的影响，在基础饲料中分别添加0（对照组）、0.1、0.2、0.4和0.6 g/kg黄芩素，配制成5组饲料，饲养平均体质量为（75.8±0.24） g的草鱼60 d。结果显示，鱼体增重率与黄芩素含量呈二次曲线关系；在添加0.2 g/kg黄芩素时，鱼体增重率最大（210.1%），较对照组提高了8.63%，而饲料系数较对照组降低0.14；添加0.2、0.4和0.6 g/kg黄芩素显著提高了血清SOD活性，降低了MDA含量，添加0.4 g/kg黄芩素显著提高了血清CAT活性。各组在AKP活性和LZM含量上无显著差异。0.4和0.6 g/kg黄芩素组的肌肉总氨基酸含量和总必需氨基酸含量显著高于对照组，0.6 g/kg黄芩素组的总非必需氨基酸含量也显著高于对照组。各处理组在肌肉水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、胶原蛋白含量、肌肉失水率以及肌纤维密度和直径上差异不显著。上述结果显示，黄芩素可促进草鱼生长，提高血清抗氧化能力。草鱼饲料中黄芩素的添加量推荐为0.2 g/kg。

摘要:实验从大弹涂鱼皮肤组织转录组中筛选出大弹涂鱼IL-8基因，并分析了其序列特征，构建了系统发生树，评估了IL-8基因在健康个体不同组织中的表达差异，以及在不同病原体刺激下IL-8基因在机体主要免疫器官肝脏和脾脏中的表达情况。结果显示，该基因的开放阅读框由306个碱基组成，编码101个氨基酸残基，包含典型的由18个氨基酸残基组成的信号肽，和1个由62个氨基酸残基组成的SCY结构域，该结构域还包含了4个保守的半胱氨酸残基，分别为Cys-30、Cys-32、Cys-57和Cys-73。大弹涂鱼IL-8氨基酸序列中的受体结合位点基序ELR （Glu-Leu-Arg）被Asn-Ser-His （NSH）取代，系统进化分析表明，纯化选择影响了鱼类该基序的多样性，且IL-8基因在大弹涂鱼乃至硬骨鱼中不可取代。荧光定量实验结果显示，IL-8基因在大弹涂鱼的健康组织中广泛表达，在鳃和脑中表达量最高。细菌和poly（I∶C）注射实验表明，在受到感染后，肝、脾和脑组织中IL-8的表达量均上调，说明IL-8基因在大弹涂鱼肝、脾和脑组织的炎性反应和免疫应答中起到了重要作用，为大弹涂鱼免疫基因的后续研究提供了参考。

摘要:本实验旨在研究饲料中添加亚硒酸钠和酵母硒对黄颡鱼幼鱼生长性能、抗氧化能力及抗低温应激的影响。实验选用初始体质量为（2.12±0.01） g的黄颡鱼幼鱼为研究对象，随机分为4组，每组3个重复，分别投喂含硒0.028 mg/kg （对照组）、0.25 mg/kg （亚硒酸钠）、0.30 mg/kg （酵母硒）和0.52 mg/kg （酵母硒）的实验饲料，记为G0、G1、G2和G3组，养殖56 d。养殖结束后，进行低温应激实验。结果显示，亚硒酸钠和酵母硒的添加对幼鱼的终末均重、增重率、存活率和饲料系数影响不显著。亚硒酸钠和酵母硒显著提高全鱼和肌肉的硒含量，G3组显著高于其他组，G1与G2组全鱼硒含量差异不显著，但G2组肌肉硒含量显著高于G1组。亚硒酸钠和酵母硒显著提高了幼鱼肝脏GPx活性，G1和G2组SOD活性显著高于G0组，G3组与G0组差异不显著。22 ℃时，各组间血浆总蛋白、胆固醇、甘油三酯和尿素氮含量无显著差异，但G2组血糖含量显著高于G0和G1组，与G3组差异不显著，各组HSP70 mRNA表达量无显著差异。13 ℃时，各组黄颡鱼血浆总蛋白、胆固醇含量无显著差异，但G1组甘油三酯含量显著高于G0和G3组，与G2组差异不显著；G2和G3组血糖含量显著高于G0和G1组；G2组血浆尿素氮含量显著低于G1组，与其他组差异不显著；G0组HSP70 mRNA相对表达量显著高于其他组。研究表明，在综合生长性能、全鱼和肌肉硒沉积、肝脏抗氧化能力以及鱼体抗低温应激效果方面，饲料中添加0.30 mg/kg酵母硒效果优于0.25 mg/kg亚硒酸钠。