摘要:

摘要:为了解Sox14基因在拟穴青蟹胚胎发育和性腺发育过程中可能起到的调控作用，实验从青蟹性腺转录组数据库中得到全长为2558 bp的Sp-Sox14 cDNA序列，该序列编码一个包含427个氨基酸的蛋白，包含一个HMG-box。进化树分析表明，Sp-Sox14与其他节肢动物的Sox14亲缘关系较近。实时定量PCR结果显示，Sp-Sox14在成蟹雌雄各组织中均有不同程度的表达，其中在卵巢和雄蟹心脏中的表达量最高。在胚胎发育过程中，Sp-Sox14在复眼色素形成期的表达量显著高于其他时期。在性腺不同发育阶段，Sp-Sox14在卵黄发生前期（O2）的表达量显著高于卵巢其他发育阶段；而在精巢发育过程中，其表达量在成熟精子期（T3）高于精母细胞期（T1）和精子细胞期（T2）。推测其参与卵巢的前期发育以及精子成熟等过程。整胚原位杂交结果显示，Sp-Sox14在青蟹胚胎复眼色素形成期阳性信号定位于头部以及鄂足附近，在近孵化期定位于复眼附近，幼体孵出期则在头部仍有少量信号，暗示其与青蟹神经器官的形成以及体节附肢的发生有关。

摘要:为获取2001年低温冻存栉孔扇贝感染牡蛎疱疹病毒（OsHV-1）变异株（ZK2001）基因组序列，并分析ZK2001与其他OsHV-1变异株的序列差异和系统发育关系，利用基于长片段PCR的基因组DNA的扩增和富集技术，获取2001年栉孔扇贝感染OsHV-1变异株的基因组DNA；再使用Illumina Hiseq 2500 PE250高通量测序平台对其测序。最后分析ZK2001与OsHV-1其他变异株基因组的序列差异和系统发育关系。测序数据组装后获得8个Scaffold。基因组变异分析结果显示，ZK2001与参考基因组相比存在328个SNP位点，SNP和序列插入/缺失变异是导致OsHV-1基因组序列变异的主要变异类型。系统发育分析结果显示，ZK2001变异株与分离自我国的OsHV-1变异株亲缘关系最近，与分离自欧洲的OsHV-1μvar及其相关变异株的亲缘关系最远，说明中国和欧洲分布OsHV-1间存在因地理隔离导致的遗传分化。研究表明，基于长片段PCR的DNA富集技术，可以有效地扩增和富集冷冻样本中OsHV-1基因组DNA，并应用于高通量测序。OsHV-1不同变异株基因组序列数据的获取和积累，将为其基因组尺度的基因变异、株系演化和系统发育关系等研究提供重要基础。

摘要:为初步了解南澳岛白沙湾海藻养殖区鱼类资源状况，利用便捷式分裂波束式Simrad EY60科学探鱼仪，于2015年4月28日、12月2日与2016年4月19日对该海域进行3次声学调查，结果显示，3次调查中藻区内、外鱼类资源丰度密度分别为3.45/1.38×10⁵、0.63/1.45×10⁵、3.67/2.98×10⁵尾/n mile²。藻区内春季鱼类资源量显著高于冬季，资源丰度密度随季节变化显著；藻区外资源丰度密度变化较小且均匀；藻区内、外鱼类资源丰度密度最高值出现于2~6 m水层，6~8 m次之，表、底层最小,资源丰度密度受深度影响显著。在海藻养殖期间，藻区内鱼类资源丰度密度较藻区外大且年变化明显，表明海藻生物量对鱼类资源量及其分布变化具有一定影响。本次调查通过声学评估技术对海藻养殖区鱼类资源进行初步评价，为其具有改善水质环境、恢复渔业资源的作用提供理论依据。

摘要:为了构建团头鲂耐低氧新品种，实验从鄱阳湖引进和挑选野生优良亲本为奠基群体F₀，2009年–2011年通过群体选育获得F₁，2011年再通过群体选育实现了F₁到F₂的传代。2012年，以鄱阳湖选育F₂亲本和团头鲂“浦江1号” F₉亲本为基础，经夏、秋季2次低氧胁迫，筛选出536尾耐低氧能力强的F₂亲本，构成团头鲂耐低氧F₂。2013年，挑选个体大、体形好的F₂亲本（雌鱼50尾、雄鱼48尾）建立了24个F₃家系群体（2♀×2♂群体22个、3♀×2♂群体2个），共100个F₃家系。对上述F₃家系群体进行1龄阶段的低氧胁迫养殖，通过测定相应生长指标和耐低氧性状，共筛选出5个快速生长家系群体（A2、A3、A18、A19和A20）和6个生长较快的家系群体（A4、A6、A17、A25、A27、A28），微卫星分析其分别归属于20个和28个家系。结果显示，团头鲂的生长性能指标与耐低氧性状呈正相关。在1龄阶段长时间低氧胁迫养殖条件下，团头鲂耐低氧F₃中耐低氧能力强的家系的体质量显著大于耐低氧能力弱的家系，选育出的团头鲂耐低氧F₃家系在2龄阶段同样保持了快速生长特征。本研究旨在建立团头鲂耐低氧F₃新品系，以供后续团头鲂耐低氧新品种的选育。

摘要:为了探讨不同主养模式池塘养殖期间沉积物—水界面氮磷营养盐通量变化特征以及与环境因子之间的相互关系，利用沉积物—水界面营养盐扩散通量的原位观测装置，分析了2013年4—10 月主养草鱼和主养黄颡鱼池塘沉积物—水界面营养盐交换通量，并探讨了影响营养盐交换通量的因素。结果发现：①在养殖初期，各种形态氮磷在养殖池塘沉积物—水界面主要表现为从上覆水向沉积物的沉积，养殖中后期，由于温度升高以及池塘沉积物中营养物质的大量累积，各种形态氮磷表现为以沉积物向上覆水扩散为主，表明池塘沉积物是氮磷营养盐的源与汇；②两种不同主养模式池塘氮磷通量的统计结果表明，沉积物—水界面NO₂^--N、NO₃^--N和PO₄^3--P通量变化无显著差异，而NH₄⁺-N、TN和TP通量有显著差异；③上覆水中DO含量的升高显著促进界面间NO₂^--N和NO₃^--N释放通量，而NH₄⁺-N和PO₄^3--P释放通量与上覆水DO浓度成显著负相关；温度的升高对各种无机形态的氮磷通量有显著的促进作用。

摘要:为进行三疣梭子蟹外观特征的研究，本研究通过计算机视觉技术建立三疣梭子蟹背部白色斑纹评估方法，经人工对比验证其准确性达100%。在此基础上，对来自海域的30只三疣梭子蟹 [平均体质量（2.8±0.56）g] 进行跟踪观察，发现蜕壳前后白色斑纹数量和位置保持不变，而白色斑纹面积和斑纹区域面积则会随着蜕壳后蟹壳面积的增加而扩大；蜕壳后，白色斑纹面积增加89.33%±8.61%，斑纹区域面积增加90.51%±7.95%，蟹壳面积增加94.66%±8.26%，均显著正相关。为进一步研究不同海区梭子蟹白色斑纹分布特征，对来自朝鲜、中国辽宁和浙江等不同海区的三疣梭子蟹进行白色斑纹个数（N）、白色斑纹面积（S₁）、斑纹区域面积（S₂）、白色斑纹面积百分比（R₁）、斑纹区域面积百分比（R₂）和密度（D）等6项参数分析，结果发现，不同海区三疣梭子蟹斑纹性状存在显著特点，朝鲜海区呈现斑纹小、分布面积少、占蟹壳总面积比例低的特点；辽宁海区呈现斑纹小、分布面积多、占蟹壳总面积比例高的特点；浙江海区呈现斑纹大、分布面积少、占蟹壳总面积比例低的特点。本研究将计算机视觉技术应用于水产养殖研究，通过建立评估参数阐明三疣梭子蟹白色斑纹的生长规律，揭示了不同群体的三疣梭子蟹白色斑纹具有地理多样性的特征。

摘要:呼吸爆发过程可以产生大量的活性氧，核因子E2相关因子2（Nrf2）在此过程中起着重要作用。实验克隆和分析了草鱼的Nrf2基因，随后制备了Nrf2蛋白的多克隆抗体，研究了其和呼吸爆发的关系。草鱼Nrf2基因cDNA长度为1994 bp，开放阅读框为1782 bp，编码593个氨基酸（aa）。氨基酸序列比对发现，草鱼Nrf2基因与鲤的同源性最高，为87%；草鱼Nrf2基因含有6个进化过程中保守的Neh [Nrf2-Epoxy chloropropane （ECH）homology]区。实时定量PCR （qRT-PCR）和蛋白印迹法（Western blot）检测结果表明，Nrf2基因在检测的草鱼8个组织中均有表达。Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚（tBHQ）处理草鱼肾细胞（CIK）后，CIK细胞总抗氧化能力显著上调，产生的活性氧下调，Nrf2及其下游的HO-1和GST基因的mRNA表达上调。Western blot和免疫荧光（IF）检测结果表明，tBHQ处理CIK后，Nrf2的蛋白表达也上调，并伴随着入细胞核现象。研究表明，保守的草鱼Nrf2基因在机体中广泛表达，能通过上调自身及其下游抗氧化基因的表达下调细胞活性氧的产生，从而参与调控呼吸爆发过程。

摘要:为研究饲料中添加3种不同的碳水化合物对大黄鱼生长性能、饲料利用以及糖代谢关键酶活性的影响，进行为期8周的生长实验和持续24 h的饥饿实验。以葡萄糖、小麦淀粉和糊精这3种碳水化合物作为糖源，设计3组等氮等脂（48%粗蛋白和12%粗脂肪）的饲料。选用初始体质量为（8.51±0.02）g的大黄鱼450尾，随机分为3组（每组3个重复，每个重复50尾）。养殖实验结束后进行饥饿实验，分别在饥饿实验开始后的0、1、3、5、7、9、11和24 h取样。结果显示，小麦淀粉组和糊精组大黄鱼的增重率和特定生长率显著高于葡萄糖组，且这2个饲料组的饲料系数显著低于葡萄糖组。糊精组大黄鱼的肝体比显著高于其余2组大黄鱼的肝体比。饲料中添加3种不同碳水化合物对大黄鱼成活率、脏体比和肥满度无显著性影响。葡萄糖组和小麦淀粉组大黄鱼血糖含量在饥饿1 h后都开始显著上升，葡萄糖组高血糖水平持续至少10 h；小麦淀粉组3 h显著下降至初始水平左右，未达到高血糖水平；糊精组大黄鱼血糖含量随着时间的推移持续升高，在11 h达到最大值，高血糖水平持续4 h。饲料中添加3种不同碳水化合物对大黄鱼血清胰岛素和肝糖原含量有显著性影响。小麦淀粉对大黄鱼肝脏葡萄糖激酶（GK）活性的升高有诱导作用。大黄鱼摄食3种不同碳水化合物饲料后鱼体血糖水平升高，但糖异生关键酶如葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）、果糖-1,6-二磷酸酶（FBPase）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）的活性并不降低。饲料中添加葡萄糖和小麦淀粉对大黄鱼肝脏丙酮酸激酶（PK）活性有显著性影响。研究表明，大黄鱼利用结构复杂的多糖（如小麦淀粉和糊精）的能力要高于单糖（如葡萄糖），3种不同碳水化合物对大黄鱼血糖调节及糖酵解和糖异生途径关键酶活性的影响存在差异。

摘要:对杂交三倍体泥鳅（4n♀×2n♂）的胚胎染色体进行了C带及染色体荧光原位杂交（FISH）分析，首次探讨了杂交三倍体泥鳅C带特征，为准确鉴别染色体提供依据，研究了核糖体5.8S+28S rDNA在杂交三倍体泥鳅胚胎中期染色体上的数目和位置。C带结果表明，杂交三倍体泥鳅的染色体C带包括臂端C带和着丝粒C带，没有发现臂间C带。M染色体只有1号染色体既有臂端C带又有着丝粒C带，但臂端C带均比着丝粒C带大，信号也比着丝粒的强；而其他M染色体及SM染色体、T染色体只有着丝粒C带。FISH分析显示，核糖体5.8S+28S rDNA清楚地定位在杂交三倍体泥鳅中期染色体中部着丝粒染色体（M）的端部区域，在杂交三倍体泥鳅中期染色体上可以检测到三簇杂交信号。该结果从分子细胞遗传学层面进一步证实了杂交三倍体泥鳅是含有三套染色体组的遗传三倍体。

摘要:为探讨鲁氏耶尔森菌侵染虹鳟的致病机制，本实验建立了鲁氏耶尔森菌感染虹鳟引起的肠炎红嘴病的病理模型，制定相应的临床症状及组织病理学评分系统，并对该模型进行研究。将43尾平均体质量约为12 g的健康虹鳟随机分成5组：3个实验组（n=30）、对照组（n=10）和哨兵组（n=3）。3个实验组分别采用2.0×10⁶、2.0×10⁷和2.0×10⁸ CFU/mL的鲁氏耶尔森菌感染浓度，通过腹腔注射方式进行人工感染试验。对感染鲁氏耶尔森菌的虹鳟肠、肝脏、脾脏和肾脏组织进行镜检及临床症状、剖检病变判断，结合细菌学检测，按制定的评分系统评价各组肠炎红嘴病造模效果，确定最佳造模方案。结果显示，各攻毒组虹鳟感染后72 h均出现不同程度死亡，临床症状表现为红嘴、肛门红肿、鳍（胸鳍、腹鳍、臀鳍）等出现不同程度充血，下颌部、腹部出现出血点等。组织病理学可见肝脏、脾脏、肾脏及肠组织均有炎性细胞浸润现象出现，肝细胞、肠上皮细胞和肾小管上皮细胞等实质细胞变性、坏死，脾脏部位淋巴细胞减少、红细胞死亡堆积。综合各组得分发现，2.0×10⁷ CFU/mL组的鲁氏耶尔森菌感染虹鳟造模效果最佳，患病虹鳟的临床症状显著且组内差异较小，病程迁延较长，便于研究。研究表明，对体质量约12 g的虹鳟幼鱼腹腔注射0.1 mL浓度为2.0×10⁷ CFU/mL的鲁氏耶尔森菌可成功构建肠炎红嘴病病理模型。

摘要:趋化因子是一类能够吸引白细胞移行到感染部位的低分子量（8~10 ku）蛋白质，在炎症反应、非特异性免疫反应中具有重要作用。实验克隆了剑尾鱼2个趋化因子基因（CCL4、CCL19）cDNA序列，运用荧光定量PCR技术检测其在健康组织和嗜水气单胞菌感染后肝、脾中的表达情况。结果显示，剑尾鱼CCL4和CCL19开放阅读框长度分别为294和333 bp，分别编码97和110个氨基酸，推导氨基酸序列均含有趋化因子CC家族标志性的4个半胱氨酸残基，与其他物种尼罗罗非鱼、鼠、狗、人、鸡的氨基酸序列相似性比较，CCL4相似度分别为71.1%、33%、33%、31%、23.5%；CCL19相似度分别为62%、26.9%、24.5%、26.6%、27.8%。在检测的健康剑尾鱼8个组织中，CCL4和CCL19均有表达，其中CCL4和CCL19均在脾脏中表达量最高；CCL4在肌肉和肠中表达量较低，而CCL19则在心脏中表达量较低。经嗜水气单胞菌感染后，CCL4在剑尾鱼头肾中12 h表达量达到最高，在肝脏中24 h表达量最高；CCL19在头肾和肝脏中均在24 h时表达量最高。研究表明，趋化因子CCL4和CCL19可能参与剑尾鱼机体免疫调节反应，在抗嗜水气单胞菌感染过程中发挥了重要作用。

摘要:为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌（GBS）荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系，本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cpsE、cpsK和neuA，通过qRT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化，同时通过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化，通过人工感染实验分析了不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示，cpsE、cpsK和neuA编码的氨基酸序列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点，CpsE、NeuA与已知鱼源GBS （Ia和Ib型）和人源GBS （Ia、Ib和II~IX型）相应序列的同源性均达到97%以上，而CpsK与鱼源、人源的序列同源性则分别为56%~100%和27%~100%。在不同培养温度下GBS cpsK和neuA基因表达水平的变化与荚膜唾液酸含量的变化一致；在较高温度（28和34 ℃）下培养的GBS荚膜唾液酸含量及菌株攻毒后罗非鱼的死亡率均随温度的升高而递增，而在22 ℃下培养的GBS唾液酸含量最高，攻毒后罗非鱼的死亡率却最低。本研究结果表明，GBS CpsK和NeuA在GBS荚膜多糖的唾液酸化中起重要作用，较低温度下GBS荚膜唾液酸的高含量有助于其在宿主体内的潜伏，而较高水温条件下细菌的强致病性可能还与除荚膜唾液酸外的某些重要的毒力因子的表达有关。

摘要:为获得三疣梭子蟹线粒体全基因组（mtDNA）SNP突变位点，本研究针对其mtDNA全序列设计了179对引物，采用高分辨率熔解曲线（HRM）检测技术对SNP进行了筛查。在179对引物中，有89对引物具有特异性扩增结果；进一步研究表明，89对引物中共有22对引物的扩增区域含有SNP突变位点，共包含24个SNPs。统计结果显示，三疣梭子蟹线粒体基因组中的SNP分布频率为0.15/100 bp，其中转换突变比例为79.1%、颠换突变比例为16.6%；C/T（G/A）突变比率为79.1%、G/T（C/A）突变比率为8.3%、A/T突变与G/C突变的比率均各占4.16%。本研究中所获得的SNP位点分布于三疣梭子蟹线粒体基因组的11个区域，且分布不均。其中COX1基因区域的SNP数目最多，其次在D-LOOP、ND1基因区域分别为3和4个SNP位点；而tRNA、12S rRNA等其他区域尚未发现突变位点。本研究所建立的三疣梭子蟹线粒体全基因组SNP的快速筛查方法及发现的SNPs，为进一步开展三疣梭子蟹种质遗传资源多样性、增殖放流标记等方面的研究提供了分析工具。