摘要:利用组织原位杂交技术,以地高辛标记的反义RNA为探针,检测了金鱼(Carassius auratus) DEAD-box家族基因p68和p110在卵子发生及精子发生中的表达分布特点.结果表明:在金鱼配子发生中,p68 基因在各个时期的卵母细胞均有表达,Ⅰ、Ⅱ期卵母细胞中的表达水平较Ⅲ、Ⅳ期卵母细胞中更高.p68 基因的表达只限于精原细胞和初级精母细胞中.p110基因在金鱼精子发生各阶段持续表达,其中精原细胞和初级精母细胞中表达水平较高;在卵子发生中,Ⅰ期卵母细胞中没有p110 RNA阳性信号,Ⅱ期卵母细胞中信号较为强烈,但在Ⅲ、Ⅳ期卵母细胞中杂交信号明显减弱.

摘要:P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶.本文采用RT-PCR和RACE法,首次分离和克隆了黄颡鱼脑P450 芳香化酶基因HP450aromB, 并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了研究.结果表明HP450aromB cDNA全长2080 bp(不包括poly(A)), 5′端非翻译区有25 bp,3′端555 bp(不包含poly(A)),阅读框(open reading frame, ORF)1500 bp,编码 500个氨基酸,推测的蛋白质分子量为56 kDa.同源性分析显示,HP450aromB的氨基酸序列与其它鱼脑P450arom具有70%以上的同源性,与其它鱼卵巢P450arom为60%左右同源,与人胚盘和鸡卵巢P450arom 则为50%左右同源;但芳香化酶高保守区包括I-螺旋区,芳香化酶特异保守区II及血红素结合区III和其它鱼芳香化酶相比同源性分别为83%～96%,78%～86%和85%～100%.系统发育分析表明HP450aromB与鱼类脑P450arom属于同一分支的,并且也显示了黄颡鱼和鲶鱼分类地位最近,这和传统的分类一致.实时定量RT-PCR研究显示,HP450arom B在前脑,下丘脑,垂体、卵巢、精巢均有表达,在肝脏没表达,表达量脑部高于性腺,但雌雄鱼脑部HP450arom B的表达总量没显著差异.

摘要:QM基因是一种与肿瘤抑制、细胞生长、分化、发育和凋亡等有关的重要基因,已在人类及许多物种中得到了克隆,但鱼类中尚无报道.我们利用表达序列标签数据库和电子克隆等技术,成功克隆了斑马鱼QM基因,并对该基因的结构进行了系统分析.结果显示,斑马鱼QM基因cDNA全长769 bp,含648 bp开放阅读框架,编码215个氨基酸,5'UTR 25 bp,3'UTR122 bp,所编码的QM多肽分子量24.6 kDa,等电点(pI)10.6,含潜在的蛋白酶C磷酸化位点、N-酰基化位点和酰胺化位点.比较斑马鱼QM和人等13个物种QM的同源性,发现其氨基酸序列相似性为66%～92%.数字化差异显示分析结果表明,QM基因在斑马鱼胚胎及成体多种组织中均有广泛表达.研究结果为今后利用生物信息学快速克隆新的鱼类功能基因打下了方法学基础,也为进一步研究鱼类QM基因功能提供了依据.

摘要:综合传统形态学数据和框架测定数据, 通过多元变量分析, 研究了我国红鲤四个品系(兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤及瓯江彩鲤)的形态差异和种系关系.主要结果: (1)可数性状方面, 4品系红鲤无显著差异(P>0.05).(2)传统可量性状和框架测定数据合在一起, 4品系红鲤间有显著差异(P<0.05);聚类分析表明, 瓯江彩鲤、兴国红鲤及玻璃红鲤三者形态相近, 而荷包红鲤与这三种红鲤的形态差异明显: 在28项比例变量基础上所作判别分析表明, 红鲤4品系问形态差异极显著(P<0.01),用优选的8项比例变量判别, 综合判别准确率达92%;主成分分析表明, 4品系红鲤间形态差异主要系躯体前半部差异所致.(3)把传统可量性状数据和框架测定数据结合在一起, 使用多种多元变量分析技术, 可大大增强鱼类种内不同群体间差异和亲缘关系的研究能力.

摘要:研究了远缘种鲤的微卫星引物对黄鳝的适用性.结果显示,31对鲤微卫星引物中有11对引物能对黄鳝DNA模板扩增出特异性带谱.每对引物扩增的等位基因数在3～13个,平均每个位点有5.6个等位基因,显示了较高的多态性.其中引物P1最理想,其PCR扩增产物能区分来自湖南、广东和孟加拉3个不同地域的黄鳝种群.应用微卫星技术对3个不同地域的黄鳝基因组DNA多态性分析结果显示,湖南、广东和孟加拉黄鳝群体内平均相似率依次为95.5%,95.8%和93.5%,平均变异度依次为0.045,0.042,0.063.群体间的相似率及变异度分析显示:湖南黄鳝和广东黄鳝群体间平均相似率为91.0%,变异度为0.045; 湖南黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为55.7%和0.443;广东黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为58.6%和0.414.综合微卫星分析结果、黄鳝的外形特征及地理位置,可以推测,广东黄鳝与湖南黄鳝为同一个生物种的不同地理种群,而孟加拉黄鳝为同属中另一个种.

摘要:采用尼罗罗非鱼上皮细胞培养模型,观察嗜水气单胞菌对鳃上皮、皮肤上皮、肠上皮细胞的粘附率,研究载铜蒙脱石对细菌粘附的阻断作用及其对细菌粘附引起鱼上皮细胞膜生物特性变化的影响.结果显示:嗜水气单胞菌与鱼上皮细胞均有不同程度的粘附作用,粘附率大小顺序为鳃上皮>皮肤上皮>肠上皮细胞.载铜蒙脱石均显著降低了嗜水气单胞菌对鳃、皮肤和肠上皮细胞的粘附率(P<0.05),而且对不同上皮细胞的粘附阻断率无显著差异.嗜水气单胞菌粘附肠上皮细胞后细胞膜生物特性发生了显著变化,与正常对照组相比,嗜水气单胞菌粘附鱼上皮细胞后,胞浆游离钙和细胞膜磷脂酶A2活性显著上升.载铜蒙脱石可显著降低由于嗜水气单胞菌粘附鱼上皮细胞引起的胞浆游离钙和细胞膜磷脂酶A2活性的升高.结果表明,载铜蒙脱石可有效阻断病原菌粘附,从而防治细菌感染和细菌移位.

摘要:以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究.经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100 凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究.结果显示:纯酶的分子量约为58 kD.纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50 ℃;pH稳定范围 6.0～11.0,30 ℃以下酶活性稳定;Mn2 可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2 、Zn2 、Ag 、Fe3 则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂对大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ无影响.50 ℃、pH 9.0条件下以双倒数作图法得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ催化酪蛋白水解的Km值为2.92 g?L-1.

摘要:采用磷酸苯二钠法在520 nm波长测定了未成熟、早熟和正常成熟中华绒螯蟹肝胰腺与性腺中的酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP).结果表明:(1)各组蟹肝胰腺ACP和ALP活性都显著高于性腺;(2)早熟蟹肝胰腺中ACP活性都显著高于未成熟蟹而低于正常成熟蟹,在各发育阶段没有性别差异,但是,早熟雌蟹和正常成熟雌蟹卵巢中ACP活性都较早熟雄蟹和正常雄蟹精巢低,早熟与正常成熟个体没有差异;(3)早熟雌蟹肝胰腺ALP活性显著高于未成熟和正常成熟雌蟹,而与三组雄蟹处于同一水平,但是,早熟和正常成熟雌雄蟹的性腺中ALP活性没有显著差异.由此得出结论:(1)性腺发育所需营养物质的动员或合成主要与肝胰腺ACP有关;(2)性早熟的发生与肝胰腺中ACP和ALP活性的显著升高有关.

摘要:从天然感染的卵圆鲳(Trachinotus blochii)分离到1株刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans),再经人工感染的方法收集各期虫体,制成电镜样品,对虫体进行超微结构研究.刺激隐核虫质膜的基本结构与淡水的多子小瓜虫的质膜相似,分为3层:外限制膜、外胞膜和内胞膜.刺激隐核虫的质膜小泡内充满大量电子致密物质(EDM).幼虫、幼体和滋养体均具有复杂的口器,由胞咽、口肋、双动基体口纤毛和线带等组成,但不具备膜口类纤毛虫所具有的独特的细胞器:Lieberkuhn氏器.单动基体的体纤毛存在于幼虫、幼体和滋养体,但在包囊期,体纤毛和口器消失.各期虫体的胞质中具有线粒体、高尔基体和脂肪体等细胞器,有的阶段具有粘液囊、伸缩泡、食物泡、共生细菌等.粘液囊在大小、形态和分布上与多子小瓜虫的不同.文中分析了刺激隐核虫在形态上与多子小瓜虫的诸多差异,认为刺激隐核虫的分类更适合归于原口类(Promotome),而不是膜口类(Ophryoglenina).

摘要:应用透射电镜技术研究了疣荔枝螺精子的超微结构.成熟精子由头部与尾部组成.头部由顶体和核构成,顶体细长锥状;核呈长圆筒状,核内沟从核后端中央向前伸至核的近前端,位于核近前端的核内沟顶端有一单个中心粒形成的基体,由基体向后发出"9 2"结构的轴丝贯穿整个精子.尾部分中段、主段和末段,中段"9 2"结构外包丝状线粒体螺旋环绕形成的线粒体鞘; 主段线粒体鞘消失,"9 2"结构外包糖元颗粒鞘;末段仅"9 2"轴丝结构外包质膜.比较了疣荔枝螺与前鳃亚纲其它动物精子结构的异同,进一步证明了顶体的有无及其形态、精核的长短与形态、尾部线粒体的形态与数目及其排列方式、糖元颗粒鞘结构的有无等是前鳃亚纲动物精子结构比较研究的主要内容.

摘要:实验用三疣梭子蟹于2003年3月-2004年6月购自浙江象山石浦港.以成熟卵、精巢、胚胎及状幼体等为材料进行三疣梭子蟹染色体数目和核型的研究.染色体制片采用组织切片法和气干法,用Olympus显微镜进行观测、摄影,依据Levan等的染色体分类标准进行核型分析.结果表明,精巢最适宜进行三疣梭子蟹染色体计数,卵内状幼体最适宜做核型分析.三疣梭子蟹染色体的数目是2n=106,n=53.核型分析显示,三疣梭子蟹有20对(第1～20号)中部着丝粒染色体(m)、3对(第21～23号)亚中部着丝粒染色体(sm)和30对(第24～53号)端部着丝粒染色体(t).因此,三疣梭子蟹核型为2n=106= 40m 6sm 60t,染色体臂数NF=152;没有检查出异形性染色体的存在.

摘要:为探寻刺参药用价值,探索其抑制肿瘤细胞增殖,促进淋巴细胞转化等生物功能.将刺参(Apotichopus japonicus)经磷酸盐缓冲溶液抽提,20%～75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到刺参凝集素(AJL).用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为85 652 Da.AJL的含糖量为20.9%.该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且对A型红细胞凝集作用最强, 在对兔、鼠、鲤鱼、鸡和人的A、B、AB、O红细胞的凝集作用中,对鸡的凝集作用最强.该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-甘露糖、γ-球蛋白、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖所抑制,而被牛甲状腺球蛋白所抑制,其最小抑制浓度为1.55 mg?mL-1.该凝集素凝集兔红细胞的作用不被二价金属离子Ca2 、Mg2 及EDTA所抑制.该凝集素在pH 4.0～10.14系列缓冲液中均有活性,其中在pH 4.4～7.5范围内血凝活性最高.该凝集活性在90 ℃加热30 min后仍然对红细胞有凝集活性,显示出较高的热稳定性.

摘要:为研究刺参对温度周期性波动的响应,本实验测定了在12,15,18,21,24 ℃ 5个恒温处理组和15?2 ℃,18?2 ℃,21?2 ℃ 3个变温处理下刺参幼参的生长、呼吸代谢和生化组成.结果表明,在恒温条件下,随着温度的升高,刺参生长逐渐加快,在18 ℃生长最快,然后随温度增加,生长逐渐降低.在15～21 ℃恒温条件下,幼参呼吸代谢无显著差异.在不同恒温处理组中,幼参脂肪含量随体重增加而增加.与恒温对照组相比,变温对幼参生长有显著性影响(P <0.05).与相应的恒温相比,平均温度低于最适温度的变温(15?2 ℃,18?2 ℃)可促进刺参的生长,而平均温度高于最适温度时的变温(21?2 ℃)会抑制刺参生长.变温使幼参耗氧率有增加的趋势,但未达到显著水平.变温造成刺参脂肪含量降低,可能与变温条件下呼吸代谢增加有关.

摘要:利用抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH)获得了海带雌、雄配子体差异表达的cDNA片段,将雄配子体差异表达的cDNA片段克隆于pGEM-T载体并转化大肠杆菌(Escherichia coli)JM109,构建雄配子体差异表达的cDNA消减文库.自750个阳性克隆中随机挑选100个进行PCR扩增鉴定,电泳图谱表明插入片段大小在200～1000 bp之间.进一步经过Southern斑点杂交筛选后,选取10个阳性克隆进行测序和序列分析,有7个片段与GenBank数据库中已知基因序列无明显同源性,初步判断为新的基因序列,3个片段与已知Fcp基因和Lhcf 6基因的同源性分别达到88%和98%.

摘要:本文基于采自杭州湾湾口、日本有明海和四万十川沿岸碎波带的天然花鲈仔稚鱼,研究比较了三者的外部形态、脊椎骨数、背鳍和臀鳍支鳍骨数的差异.杭州湾湾口和有明海水域的花鲈样本,体侧黑色素较少;吻长、体高和体长比相对较小;脊椎骨数分别为35,35.25?0.25;背鳍支鳍骨的平均值分别为25.33,25,均比四万十川的样本脊椎骨数(36)和背鳍支鳍骨的平均值(26)为少,探明了杭州湾湾口和有明海的花鲈仔稚鱼在特征上存在着相似性,与四万十川的样本有显著的差异.根据中国产花鲈的形态特征,对中国花鲈的学名进行了探讨,认为中国花鲈的学名应该为 Lateolabrax maculates (McClellan).

摘要:研究了杭州湾南岸慈溪滩涂贝类养殖区的微生物在水平、垂直及季节变化的分布规律.结果表明:3个采样区的异养细菌的数量变动在1.62?103～6.62?105cfu?g-1之间,平均值为4.28?104 cfu?g-1,细菌数量在春季和夏季的数量偏低,10月份异养细菌的数量开始上升,并于11月份达到最高,表层高于底层;其中以革兰氏阳性菌比例最高,为主要的优势种,具有陆源性特点.各站位反硝化细菌、氨化细菌和硫酸还原菌的检出率均为100%,都维持在一个较高的水平,整体上数量具有表层高于底层的特点,3种微生物在数量上的季节演替与异养细菌具有类似的结果,均为10-11月达到最大.

摘要:降海鳗鲡一直是作为研究鳗鲡人工繁殖的材料,由于降海鳗鲡的资源衰退,选用池塘养殖鳗鲡作为亲本的研究成为热点.尽管人工诱导野生降海鳗鲡获得的胚胎发育过程的研究已报道,但人工诱导池塘养殖鳗鲡的胚胎及仔鱼早期发育未见报道.本文应用池塘养殖日本鳗鲡取代野生降海日本鳗鲡进行人工繁殖,2002年的孵化批次共80次,其中大部分为人工授精卵(60次),一部分(20次)为自然产卵.受精率为(44.03?21.99)%,孵化率为(65.76?19.48)%,共计获得苗种349.9万尾.连续记录了鳗鲡的胚胎和早期仔鱼的发育过程.在水温为20.5 ℃时,胚胎发育需要时间为49 h,所需积温1005 ℃?h;在水温为22.5 ℃时,胚胎发育需要时间为39 h,所需积温878 ℃?h;在水温为24.5 ℃时,胚胎发育需要时间为34 h,所需积温833 ℃?h.

摘要:为研究植物生态净化技术集成至循环流水水产养殖系统的可行性,构建了4个(4重复)3.0 m?0.5 m?0.05 m(长?宽?高)的植物滤器处理淡水白鲳(Colossoma brachypomum)高密度养殖废水.每个植物滤器生长0.8 m2 NFT(营养液膜技术)培多年生黑麦草(Lolium perenne L.).废水每周更换一次,每次25.4 L,连续运行40 d.7 d循环灌溉处理后,NO-3-N、TN、TP、COD的去除率分别达96.1%、86.2%、90.5%、88.7%,pH从6.4升高至8.4,而水体积只消耗29.7%.除UIA由于pH升高而超标外,所有水质指标均符合渔业水质标准.牧草日增长仅2.3 mm,显著低于用商品营养液培育的牧草生长速度(日增长13.2 mm).鲜草TAN和NO-3-N含量分别为107.9和42.5 μg?g-1,试验结束时收获鲜草582.9 g?m-2,烘干后得到干草102.5 g?m-2,干湿比0.176.结果表明,植物滤器能解决生物滤器引起的N、P、COD累积以及pH下降等问题,是一种环境友好的水处理方法.为使牧草良好生长,建议定期将牧草返回培育系统用商品营养液培养一段时间.

摘要:挤压蒸煮处理可以改变鱼肉蛋白质的功能特性,这些改变与挤压机的操作参数是密不可分的.利用响应面分析方法研究Clextral BC-45型双轴挤出蒸煮机的操作参数对鱼肉蛋白质进行热塑挤压组织化的影响.研究的3个操作参数分别是末段腔体温度,螺杆转速和喂料湿度,每一个变量设5个水平.测量作为组织化产物功能特性的持水性指数及质构特性,分别建立持水性与操作参数,质构特性与操作参数的回归拟合方程.研究结果表明喂料湿度、螺杆转速和腔体温度对挤出物质构的影响是不同的;持水性与操作参数,质构特性与操作参数的回归拟合方程的相关系数R2分别是1.000和0.933,拟合的统计模型可信度高.

摘要:早在19世纪末期,人们在有限的海洋水文调查的基础上,就开始了渔场海洋学的研究探索并试图进行渔情分析和渔场预报[1].但由于当时的技术条件限制和所获数据非常有限,其分析预报结果可想而知.20世纪60年代卫星遥感技术出现之后,人们开始能够快速获取大范围实时或准实时的海水表层温度(SST)、海洋水色、海洋动力环境等渔场环境信息,渔场渔情分析预报逐渐实用化.尤其是近十年来随着卫星遥感反演数据精度的大幅度提高和数据源的增多,日、美等渔业发达国家的渔场渔情分析预报工作渐进入业务化应用阶段.20世纪60-80年代,海洋渔场渔情分析预报在我国也极为受管理部门和生产单位的重视,国内许多学者都进行了研究探索[2-5].80年代中后期开始,由于我国近海渔业资源的衰退、渔业生产主体及生产结构的重大变化,渔场渔情分析预报的研究应用也一度陷入困境.

摘要:方头鱼属暖水性底层鱼类,据记载中国有4种.本文报导的是1998年8月-2004年6月在27?00′～34?00′N、128?00′E以西海域深水流网作业捕捞的日本方头鱼(Branchiostegus japonious)和白方头鱼(Branchiostegus albus)混合群体的生物学特性和资源状况.本海域方头鱼捕捞群体体长范围100～390 mm,平均体长223.9 mm.体重范围30～1470 g,平均体重231.5 g,捕捞群体1～9龄,以1～3龄为主,体长与体重关系呈幂函数曲线增长,雄鱼平均体长、体重比同龄雌鱼大,但肥满度雌鱼略高.捕捞群体雌、雄比例接近1∶1.2.浙江近海有产卵场,主要产卵期在4-8月.方头鱼属广食性肉食性鱼类,在繁殖期间不停食.本海域的日本方头鱼主群分布在126?00′E以东海域,白方头鱼主群分布在124?00′E以西海域,124?00′～126?00′E为混栖区域.方头鱼在深水流网作业渔获总重量中约占30%,居其它种类之首.目前方头鱼资源虽未见明显衰败,但与早期比较,其产量占深水流网总渔获量比重已明显下降.因此,必须合理利用,保护该种资源维持相对稳定.

摘要:动物线粒体DNA(mtDNA)具有比核DNA的进化速率快等特点,而被广泛地应用于生物的起源、演化和种群遗传学研究[1].完整的线粒体基因组包括37个基因:13个编码疏水性蛋白质亚基基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因.各基因排列紧密,不含内含子,且有些基因区域出现重叠.Zardoya和Meyer考察了脊椎动物mtDNA上13个蛋白编码基因,认为ND4、ND5、ND2、Cytb和COI基因包含良好的系统发育信息[2].从Anderson等测定了人的线粒体基因组全序列开始[3],目前已有多种动物的线粒体DNA全序列或部分基因序列被测定[4-12].

摘要:金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类小分子的蛋白质,能螯合金属离子,调节微量元素(主要为Cu、Zn)贮存、运输和代谢及具有对重金属中毒解毒作用和清除氧自由基的功能[1-5].目前,关于重金属胁迫对甲壳动物MT含量的影响国外已有一些研究报道[6-8];国内这方面尚未见报道.本文研究了3种重金属离子对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰脏MT含量的影响,探讨了凡纳滨对虾对重金属离子的解毒机理,为甲壳动物养殖环境毒理学的研究奠定了理论基础,也为对虾养殖水环境污染监测提供了科学依据.

摘要:近几年,国外的工厂化循环水养鱼系统中普遍采用了一种新型的水处理设备--蛋白质分离器(protein skimmer)[1].国内的一些单位已开始从德国、美国等引进小型的蛋白质分离器,并应用在水族馆及宾馆、饭店的观赏鱼的养殖中,使用效果较好.蛋白质分离器利用泡沫分离原理并与臭氧联合使用,可有效地去除水中的悬浮物、蛋白质和氨氮,并增加水中的溶解氧,同时具有杀菌消毒作用[2].

摘要:大型海水养殖网箱是我国近年来发展较快的渔业设施.纤维绳索是网箱工程系统中的一个组成部分,作为网箱纲绳或在锚定装置中广泛应用[1-3].绳索的伸长性能由原材料、绳索结构、制作工艺等诸多因素决定,是最具个性的绳索特性.国内、外绳索产品标准和企业产品样本中都很少见绳索伸长性能指标.在网箱的设计中,须掌握绳索的伸长性能,若设计的网箱纲绳伸长率大、长度太长,可能致使网箱变形或走位;若选用的锚缆伸长率太小、长度不足,又将被风浪冲击而断裂.本实验选取用作网箱纲索和锚缆的几种规格、包括新型材料制成的绳索,进行伸长性能的测定和分析研究,供网箱设计参考.