摘要:

摘要:肌球蛋白是肌肉细胞的重要组成成分，影响肌纤维的组成和肌肉生长。为了研究肌球蛋白重链（MYH）基因多态性与大口黑鲈生长性状的相关性，本研究采用PCR技术扩增得到编码区序列全长为9759 bp的大口黑鲈MYH基因，该基因包含37个外显子和36个内含子，编码1940个氨基酸。采用直接测序法在MYH基因上筛选到8个单核苷酸多态性标记（SNP）位点（A-305G、G-558C、A-2784C、A-2816G、T-4765A、C-6206T、C-6811T和G-6935T），有4个位于外显子上，其中2个属于同义突变。用SNaPshot方法对从同批繁殖、同塘养殖的大口黑鲈“优鲈1号”群体中随机选取的430尾个体中各位点的基因型进行检测。结果显示，内含子上的A-2784C和A-2816G位点完全连锁，所有位点在大口黑鲈“优鲈1号”群体中的平均有效等位基因数、平均观测杂合度和平均期望杂合度分别为1.635、0.406和0.373，仅C-6206T、C-6811T和T-4765A位点的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg定律。采用一般线性模型分析各位点与大口黑鲈生长性状之间的相关性，研究发现，C-6811T位点CC基因型个体的体质量和全长显著大于TT基因型，CC基因型个体的体高和尾柄长显著大于CT和TT基因型，其余位点不同基因型个体间的生长性状均不存在显著差异。C-6811T位点与生长性状显著相关，可作为大口黑鲈分子标记辅助育种的候选标记。

摘要:针对12株引起凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病（AHPND）的致病性副溶血弧菌，运用多位点测序技术，分析致病菌株的遗传特征。实验选择副溶血弧菌的7个管家基因dnaE、gyrB、recA、dtdS、pntA、pyrC及tnaA，对12株AHPND致病菌扩增测序。将核酸序列上传至PubMLST数据库进行比对后获得每株菌的序列型。收集其他地区AHPND致病性副溶血弧菌的多位点序列分型（MLST）数据，采用eBURST V3及MEGA 5.0软件进行遗传进化分析。结果显示，2014年中国广东分离的AHPND致病株属于一个新序列型ST1710（42、134、99、79、141、41、51），仅与库中ST415及ST975同源性较高。目前，急性肝胰腺坏死致病株的9种ST型可归为2个克隆组和5个单体。经系统发育树进一步分析可知新序列型ST1710与单体ST975遗传关系相近。本研究首次报道中国AHPND分离株的序列型，丰富了PubMLST数据库，并为其遗传进化研究奠定了理论基础。

摘要:为了研究珠母贝属的分类地位和系统演化情况，通过聚合酶链式反应技术（PCR）扩增并直接测序出雷州半岛珠母贝属中的马氏珠母贝、大珠母贝、珠母贝、斑珠母贝和黑珠母贝的3种线粒体基因（12S rRNA、16S rRNA和COⅠ）部分序列，分析其碱基组成和种间遗传距离。同时结合GenBank上发表的白珠母贝序列，构建珠母贝属的分子系统树。结果显示，5种珍珠贝的3种基因部分序列碱基AT含量大于GC含量，与其他无脊椎动物线粒体DNA序列基本一致，序列都处于高度饱和的状态。系统分析显示，构建的分子系统树与传统的形态分类基本一致。在黑珠母贝和白珠母贝亲缘关系上，3种线粒体DNA片段在碱基组成、种间遗传距离和系统进化树上都显示黑珠母贝和白珠母贝非常相近，可以认为是同一种中的2个亚种。在斑珠母贝的亲缘关系上，系统分析显示斑珠母贝与黑珠母贝和白珠母贝更为接近。研究表明，大珠母贝和珠母贝在系统进化中较早的分离出来，是一个比较原始的种类。3种分子标记对马氏珠母贝亲缘关系分析上存在一定差异，根据现有的数据尚不足以得出结论，需进一步做分子系统研究并结合形态特征和解剖结构进行分析。

摘要:鱼类诺卡氏菌病是一种慢性系统性肉芽肿疾病，鱼诺卡氏菌是其主要病原。鱼诺卡氏菌全基因组生物信息学分析，发现了一个可能靶向定位于宿主细胞线粒体的分泌蛋白——动力蛋白调节蛋白robl/LC7。为了对鱼诺卡氏菌robl/LC7的亚细胞定位和功能进行初步研究，实验对鱼诺卡氏菌robl/LC7进行了基因克隆、真核表达重组质粒构建、分泌蛋白鉴定、亚细胞定位、过表达和凋亡检测。结果显示，成功克隆了鱼诺卡氏菌robl/LC7基因并构建了其真核表达质粒pEGFP- robl/LC7和pcDNA- robl/LC7；鱼诺卡氏菌分泌蛋白质谱鉴定证实robl/LC7为分泌蛋白；亚细胞定位研究显示robl/LC7-GFP融合蛋白呈全细胞分布，不与线粒体共定位；凋亡检测发现robl/LC7过表达能诱导FHM细胞凋亡。研究表明，鱼诺卡氏菌robl/LC7是一个不与线粒体共定位的分泌蛋白，其可能通过参与细胞凋亡调控，协助鱼诺卡氏菌在宿主体内生存和免疫逃避，并在鱼诺卡氏菌的致病过程中具有重要作用。

摘要:为筛选影响三角帆蚌珍珠颜色的候选基因，采用转录组测序平台Illumina HiSeq^TM 2500对蚌壳珍珠层颜色为紫色和白色的三角帆蚌中央膜组织进行高通量测序。所得序列经质控、组装后比对到NR、Swiss-Prot、COG、KOG、KEGG、GO和Pfam数据库中注释，并进行差异基因聚类分析。结果显示，获得干净数据共72 800 581 bp，拼接获得了89 529个Unigene，差异表达基因2644个，其中上调表达基因1323个，下调表达基因1321个。根据GO功能分类可分为分子功能、细胞组分、生物过程等3大类50分支；根据KEGG代谢通路分析可以分为187类。对差异表达基因分析发现，部分基因与色素合成（眼黄素、黑色素、喋啶色素）及金属离子转运相关，还有6个细胞色素P450，3个细胞色素b561和1个细胞色素b560。研究表明，这些基因可能在珍珠颜色形成中发挥作用。

摘要:为了阐明山东省潍坊市一对虾养殖场发生日本囊对虾暴发性死亡的原因，采用分子生物学检测方法，对发病对虾进行了白斑综合征病毒（white spot syndrome virus, WSSV）、桃拉综合征病毒（Taura syndrome virus, TSV）、黄头病毒（yellow head virus, YHV）、传染性皮下及造血组织坏死病毒（infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus, IHHNV）、传染性肌肉坏死病毒（infectious myonecrosis virus，IMNV）、偷死野田村病毒（covert mortality nodavirus，CMNV）及急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND）7种病原的检测，且对发病对虾进行了常规组织病理学观察。同时采用16S rDNA细菌鉴定方法及浸泡回接感染实验对分离自发病对虾体内的可疑病原菌进行了分子鉴定及毒力测试。结果显示，发病对虾样品核酸检测呈现WSSV强阳性，IHHNV和CMNV为弱阳性，其他4种病原为阴性。组织病理学观察发现，在对虾的胃、鳃等上皮组织中存在WSSV包涵体，头部肌肉纤维出现离散。对分离编号为2901、2902、2903的3株优势可疑病原菌鉴定结果显示，3株菌分别与印度格里蒙菌、交替单胞菌及溶藻弧菌相似，相似度分别为99%、99%及100%。攻毒结果显示，3株可疑病原菌的LC₅₀分别为9.8×10⁷ 、1.1×10⁸与2.3×10⁸ CFU/mL，各细菌毒力均较弱，非导致对虾出现暴发性死亡的病原。研究表明，导致本次日本囊对虾暴发性死亡的病因与混合感染病原WSSV、IHHNV、CMNV有关，其中WSSV感染是造成日本囊对虾暴发性死亡的主因，研究结果可为解析当前养殖日本囊对虾疾病暴发及其成因提供参考。

摘要:染色体核型分析是细胞遗传学研究的主要内容。为了获得准确、便捷的染色体核型分析方法，以引进耐盐碱品种大鳞鲃为实验材料，取头肾细胞冷滴片法制备染色体标本，采用E-ruler测量软件和Photoshop图像软件结合完成了染色体核型分析，并与常规方法的测量结果、核型分析进行了比较。结果显示，E-ruler软件与常规方法对伸展平直染色体的测量无显著差异，前者对弯曲形态染色体的测量结果更为准确；Photoshop图像软件能剔除染色体中期分裂相照片的背景，准确判断着丝粒的位置，快速、便捷地完成染色体核型图拼贴。研究表明，利用E-ruler软件和Photoshop软件相结合可获得准确、清晰的核型分析结果，本方法适用于其他鱼类和生物的染色体核型分析。染色体分析结果显示，大鳞鲃的染色体组为二倍体，未发现与性别有关的异型染色体，核型公式为2n=100=12m+38sm+38st+12t，NF=150。同鲃科其他鱼类的核型相比，大鳞鲃与国内几种倒刺鲃核型类似，具有鲃亚科进化核型特征。

摘要:以斑马鱼和巨噬细胞作为体内、外感染模型，比较无乳链球菌鱼源株GD201008-001与人源株A909的致病性差异，利用iTRAQ技术和质谱分析技术进行差异表达蛋白鉴定，以期为揭示无乳链球菌不同宿主来源株致病机制提供新思路。实验通过测定菌株 GD201008-001、A909的斑马鱼半数致死量和巨噬细胞吞噬率，比较二者致病性差异；提取全菌蛋白，经iTRAQ试剂标记后进行质谱鉴定，质谱数据用软件Mascot 2.2和Proteome Discoverer 1.4进行查库（UniProt数据库）鉴定及定量分析，并对差异蛋白进行GO功能注释和KEGG通路分析。结果显示，GD201008-001毒力显著高于A909；通过iTRAQ分析两株菌差异表达蛋白，发现差异蛋白涉及的生物学功能较为广泛，在鉴定出的368个差异表达蛋白中，GD201008-001中上调表达蛋白193个（比值>1.5），下调表达蛋白175个（比值<0.667）。生物信息学分析预测这些蛋白主要涉及26个生物学功能，14个通路，推测ClpX、GlmS和CpsIVK可能在两株菌致病性差异中发挥重要作用。本研究为阐明无乳链球菌不同宿主来源株致病性差异奠定了基础。

摘要:根据2013年10月–2014年2月在北太平洋海域（29°08'~41°08'N，163°50'~144°19'W）采集的364尾长鳍金枪鱼的卵巢样本，利用组织学分析，详细描述了长鳍金枪鱼卵巢、卵细胞的发育阶段。结果显示，北太平洋长鳍金枪鱼卵巢内同时存在不同时相的卵细胞，为分批产卵类型；组织学上，长鳍金枪鱼的卵细胞发育过程分为6个时相，卵巢发育过程分为6个时期；卵巢成熟指数在成熟期为Ⅰ~Ⅴ期时逐渐增大，在Ⅵ期时减小；北太平洋长鳍金枪鱼产卵高峰为12月中旬和1月初，其卵巢成熟指数随纬度的升高呈递减趋势，随经度变化规律不明显。研究表明，通过对北太平洋长鳍金枪鱼卵巢的发育特征的分析与探讨，可为北太平洋长鳍金枪鱼的资源状况评估及渔业可持续发展提供生物学信息。

摘要:采用集中质量点法和网目群化法，结合数值模拟技术探讨了桩柱式围网网片单元在水流作用下的力学特性，着重分析了不同网片宽度和固定方式下网片单元的网线张力分布、节点偏移和网片系缚点受力特性。结果显示，水流作用下，桩柱式围网网片的最大张力主要分布于网片顶部和底部力纲的两侧，最大张力值与网片宽度成正比；网片的最大偏移部位主要分布于网片的上下端，最大偏移量与网片宽度成正比；系缚点最大受力出现在网片的顶端和底部，且其受力在数值上均远远大于中间系缚点；研究发现，随着系缚点数的增加，各系缚点的受力不断下降，网线张力和偏移量也迅速减小；当系缚点超过一定数量时，网线张力和偏移量将不再显著下降，表明存在一个临界系缚点数。本研究可为桩柱式围网工程的设计与安装提供参考。

摘要:南极磷虾作为南极生态系统中的关键物种，磷虾渔场时空演变规律对于磷虾海洋生态功能影响及其资源管理十分重要。本研究利用我国磷虾渔业生产数据，按照月份组合，针对南极半岛北部磷虾渔业，采用点模式方法，利用3个空间因子：经度、纬度和离岸距离，获得各月磷虾资源分布最佳点模式模型和模型的方差分析结果，并以最佳点模式模型推知可能潜在的渔场分布。结果显示，（1）12月磷虾渔场离岸距离最大（为45 km），随后，渔场逐渐向南设得兰群岛岸线逼近，至3月时渔场离岸最近，3月之后，磷虾渔场逐渐远离海岸线，4月和5月渔场离岸距离大约在13 km左右。（2）点模式模型的方差分析结果发现，12月，1月，3月和4月最优点模式模型对模型的方差解释率分别为59%、60%、57%和68%，空间因子能够较好拟合磷虾渔场分布，而2月和5月，空间点模型对总体方差的解释率分别为38%和32%。（3）夏季12—1月，磷虾渔场分布在乔治王岛北部；2月，在利文斯顿岛周围形成第2个渔场，以及布兰斯菲尔德海峡中部形成第3个渔场；3—5月渔场基本分布在布兰斯菲尔德海峡沿南极半岛岸线平行方向分布。研究表明，南极半岛北部磷虾渔场的离岸距离远近与该海域海冰边界消融和生长的规律相吻合；基于空间因子点模式模型在大部分月份均能较好地拟合磷虾渔场的时空演变规律，再配合单位捕捞努力量渔获量（CPUE）数据，可以作为探测磷虾群热区的潜在手段。

摘要:为探讨饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学结构和卵黄蛋白原基因表达的影响，本研究采用2×2双因子随机区组设计（日粮类型：0%和4%大豆卵磷脂；三疣梭子蟹交配处理：已交配和未交配），共4个处理组，以大豆卵磷脂0%和4%两种人工配合饲料分别投喂交配和未交配两组三疣梭子蟹雌蟹，进行了为期12周的饲养实验。结果显示，无论三疣梭子蟹是否交配，饲料中添加4%大豆卵磷脂可显著增加三疣梭子蟹的卵巢指数，提高血清中卵黄蛋白原、孕酮和雌二醇的浓度，增大卵母细胞直径；同时上调肝胰腺卵黄蛋白原mRNA相对表达量，但无显著性差异，肝胰腺指数呈现出和卵巢指数相反的趋势；交配后的三疣梭子蟹卵巢指数、肝胰腺卵黄蛋白原mRNA表达量显著高于未交配组。组织学观察显示，交配使得三疣梭子蟹卵母细胞沉积更丰富的卵黄颗粒，促进卵母细胞成熟，交配处理对肝胰腺指数和血清中卵黄蛋白原及孕酮的水平无显著性影响。此外，饲料磷脂水平和交配处理的交互作用显著影响了三疣梭子蟹血清中类固醇激素孕酮和雌二醇的浓度。本实验结果显示，饲料中大豆磷脂和交配处理均能促进雌性三疣梭子蟹的卵巢发育，交配处理对卵母细胞成熟的促进作用更为明显。

摘要:为获得具有单一克隆特性的能稳定传代培养的罗非鱼巨噬细胞系，本研究从尼罗罗非鱼腹腔中分离纯化巨噬细胞，采用EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）感染，筛选单克隆细胞的方法建立了尼罗罗非鱼巨噬细胞系，并对其进行了EBV感染鉴定、电镜观察、端粒酶活性检测、致癌性评估、核型分析以及分子生物学鉴定。研究表明，EBV已整合到尼罗罗非鱼巨噬细胞中且稳定表达，经30代稳定传代，该细胞系仍维持较好的增殖状态；该细胞系表面不平滑，有明显的钝圆形突起和细长的伪足，表现为典型的巨噬细胞形态；端粒酶活性显著高于未经感染的巨噬细胞，而与HeLa细胞差异不显著，且该细胞系不具有致癌性，说明永生化细胞系构建成功。核型分析结果发现，该细胞系具有44条染色体，其核型公式为2 n=2 x=44=4 sm+17 st+1 t。PCR检测发现，该细胞系存在CD33和CD205的转录本，这些都是单核巨噬细胞的标志物，经18S rRNA检测证明该细胞系来自尼罗罗非鱼巨噬细胞。永生化尼罗罗非鱼巨噬细胞系已被成功建立，该细胞系为研究罗非鱼链球菌HSP70-肽疫苗的高保护率，以及罗非鱼的免疫防御机制提供了工具。

摘要:为了研究不同健康程度和抗生素氟苯尼考干预下斑石鲷肠道菌群结构的差异及其与养殖环境中菌群结构的相关性，采用Illumina HiSeq PE250高通量测序的方法对健康、亚健康、典型黑身病和口服氟苯尼考条件下的斑石鲷肠道、养殖水体和颗粒饵料中的细菌多样性及群落结构进行了分析比较。结果显示，养殖水体中细菌多样性高于肠道和颗粒饵料。不同健康程度及氟苯尼考干预下斑石鲷肠道中细菌均以变形菌门、厚壁菌门和软壁菌门为主，且对应的操作分类单元（OTU）占样品全部OTU的比例均达到85%以上。黑身病的发生可影响斑石鲷肠道中丰度最高的前20种优势细菌种类的排名次序，其中变形菌门中的弧菌属的相对丰度显著增加，且随着弧菌属丰度的增加，斑石鲷的黑身病症状也逐渐加重。饵料中添加氟苯尼考投喂斑石鲷能使患病鱼肠道弧菌属的丰度从60.33%下降到1.29%，较大程度改变了肠道的菌群结构，并证实氟苯尼考有效防治黑身病。其次，养殖水体和颗粒饵料对斑石鲷肠道菌群也有一定影响，且养殖水体的影响高于颗粒饵料。本研究首次报道了斑石鲷肠道菌群结构，其研究结果为今后斑石鲷的健康养殖、疾病防控及其微生态学研究提供了参考依据和技术支撑。

摘要:为探究病害发生后健康与患病凡纳滨对虾肠道菌群结构和功能的差异，并筛选肠道指示菌群来评估宿主健康状况，评价凡纳滨对虾肠道菌落的功能冗余性。实验采集健康和患病凡纳滨对虾样品，通过Illumina高通量测序技术测定肠道菌群组成，并利用PICRUSt进行功能预测，以此比较健康与患病凡纳滨对虾肠道微生物的群落结构和功能差异，并预测功能与群落组成的相关性。结果显示，病害的发生伴随着肠道菌群结构的显著变化，而多样性无显著差异。与健康凡纳滨对虾肠道细菌组成相比，患病凡纳滨对虾肠道中放线菌门（Actinobacteria）、浮霉菌门（Planctomycetes）和疣微菌门（Verrucomicrobia）相对丰度降低，而γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidetes）增加。同时，筛选出16个指示细菌科，能够很好地指示宿主健康状况。与健康组相比，患病凡纳滨对虾中参与弧菌侵染的过程显著增加，而溶酶体和过氧化物酶等免疫功能代谢过程显著减弱。此外，肠道微生物群落结构与功能组成呈显著正相关，表明凡纳滨对虾肠道菌群组成具有较低的功能冗余性。研究表明，健康与患病凡纳滨对虾肠道菌群结构存在显著差异，并且由细菌介导的功能随之发生改变，能够用指示微生物评估宿主健康状况。