摘要:

摘要:为了建立草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法，本研究在采用刮除法结合胶原酶IV消化法制备肠黏膜固有层单细胞悬液的基础上，使用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞，再经差异贴壁法纯化肠巨噬细胞，最后，用含10%胎牛血清和5%草鱼血清的RPMI 1640完全培养液，在28℃、5% CO₂条件下原代培养肠巨噬细胞，并通过细胞形态学检查、分子标记检测和功能验证实验加以鉴定。结果显示，每尾鱼（约250 g）肠巨噬细胞的获得量约为3×10⁷个，细胞活率为99.6%，纯度达到95%以上；倒置显微镜观察发现，原代培养4~5 d的贴壁细胞多呈圆形或多边形，体积明显增大，细胞汇合度达到95%；光镜和电镜观察到染色后的贴壁细胞具有巨噬细胞的形态结构特征，贴壁细胞经荧光定量PCR在mRNA水平检测到巨噬细胞特异性标志分子（草鱼巨噬细胞集落刺激因子受体），功能实验证实贴壁细胞具有吞噬功能，脂多糖能够显著提高其呼吸暴发活性。本研究首次成功建立了草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法，为开展口服疫苗诱导的草鱼肠黏膜免疫应答研究提供细胞模型。

摘要:染色体是遗传物质的载体，是研究细胞遗传学的基础，为研究克氏原螯虾染色体及其核型，实验以性未成熟雄性个体的精巢为材料，采用低渗和空气干燥常规方法制备细胞分裂中期染色体标本，研究了克氏原螯虾染色体及核型。Giemsa和DAPI染色后在显微镜下观察到清晰的精母细胞减数分裂中期二价体和精原细胞有丝分裂中期染色体时相。对减数分裂中期二价体及有丝分裂中期染色体进行了数目上的统计。结果显示，克氏原螯虾二倍与单倍染色体数目分别为2N=188和N=94。由于有丝分裂染色体形状微小，核型分析困难，故选取减数分裂中期二价体，根据长度及着丝点位置对其进行了初步核型分析，核型公式为N=55M+22（SM，ST）+17T，未发现异形性染色体。

摘要:为从蛋白质水平研究细胞因子在鲤体内免疫应答过程中的合成变化，本研究采用PCR技术克隆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β基因含有部分抗原决定簇的片段，引入双酶切位点BamH Ⅰ和Hind Ⅲ后连接至pET-32a/21a，构建相应的表达载体，制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价，并以此作为实验工具，检测经嗜水气单胞菌感染后鲤血清中炎性细胞因子的合成变化。结果显示，基因TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β融合蛋白分子量分别约为31.8、31.7、35.3、32.5、18.0和33.6 ku；抗体效价达到2.4×10⁶；在病原菌感染后的不同阶段，促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和抗炎细胞因子IL-10、TGF-β呈现出不同的合成变化。研究表明，制备的抗体具有较高的效价、亲和力和特异性，可用于鲤细胞因子的定量研究，该抗体的获得为鲤免疫应答与细胞因子合成的系统研究奠定了基础。同时，获取的鲤细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β的抗体亦可用于其他鱼类细胞因子蛋白质水平的定量研究。

摘要:为探讨Caspase募集功能域（CRAD）在鲍发育和应激中的作用，实验通过比对杂色鲍转录组序列和RACE扩增的方法，获得了杂色鲍一条含CRAD的基因全长cDNA，命名为HdCRAD；采用实时定量PCR的方法获得了该基因在发育和应激中的表达谱。结果显示，HdCRAD的cDNA全长1 371 bp，开放阅读框735 bp，编码244个氨基酸。编码蛋白具有保守的CRAD功能域。该基因在各检测组织中均可表达，在黏液腺中表达量最高；在发育各阶段也均有表达，面盘幼虫晚期表达量最高。在细菌感染、高温或缺氧应激处理后，血细胞的HdCRAD表达水平均有显著性变化。在担轮幼虫时期，RNA干扰该基因会显著提高幼虫畸形率；幼虫的caspase-8和DAD1的表达水平会显著上升，而caspase-3的表达水平会下降。研究表明，该基因参与了鲍幼虫发育过程；在成体免疫、耐高温和抗低氧中发挥了一定作用。

摘要:为更好地开展鳜基因功能研究和药物筛选工作，提高基因转染效率，本研究以鳜囊胚期胚胎为材料，采用含有20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养，建立了生长稳定的鳜胚胎细胞系MFE。在此基础上，采用绿色荧光蛋白（GFP）作为标记物，在HEK293T细胞中体外包装逆转录病毒，再感染MFE细胞系。MTT法分析表明传代后细胞培养96 h内，细胞生长率变化也经历增殖、降低到达稳定期。而且MFE细胞能稳定表达GFP基因，感染效率为20%±5%，而脂质体转染效率为3%±2%。可见包装病毒感染细胞不仅能获得稳转细胞系，效率也远高于脂质体瞬时转染。荧光定量PCR分析表明，MFE细胞系能表达Irf1、Irf3和Irf7基因，Irf1基因表达量最高。MFE细胞系受到poly I：C刺激后，Irf1、Irf3和Irf7的表达量分别升高3.5，2.3和2.1倍。因此，MFE细胞通过病毒感染可以获得较高的转染效率，该细胞可作为鳜免疫相关基因功能研究的工具。

摘要:采用生物毒性测试的方法，研究了持续暴露96 h不同浓度Cu²⁺胁迫对魁蚶生理代谢、组织结构及酶活性的影响。实验设置0.01、0.05、0.10、0.50和1.00 mg/L组5个浓度梯度，不加Cu²⁺的正常海水作为对照。结果显示，Cu²⁺胁迫对魁蚶耗氧率（OR）、排氨率（NR）、氧氮比（O∶N）均有显著影响，并且与暴露时间和浓度有关。初次暴露时，OR，NR和O∶N都迅速下降，最低值都出现在1.00 mg/L浓度组，分别为（0.005±0.001） mg/（g·h）、（0.5±0.05）μmol/（g·h）、0.7±0.1，仅为对照组的1%、29%和3%。暴露72 h内Cu²⁺胁迫均使魁蚶代谢率不同程度下降，之后不同处理组出现差异分化。暴露96 h时，魁蚶对低浓度Cu²⁺暴露表现出适应，0.01 mg/L处理组呼吸代谢恢复至正常水平，O∶N与对照组无差异，组织结构也未见明显损伤；浓度超过0.05 mg/L处理组魁蚶生理代谢及组织结构受显著影响，O∶N大多降至9以下，出现鳃丝受损和组织结构散乱等明显损伤；0.10 mg/L处理组魁蚶体内ACP和ALP活性在鳃组织中增强，肝脏中受到抑制，而GPX和GST活性增强。研究表明持续暴露96 h Cu²⁺浓度≥0.05 mg/L环境显著影响魁蚶生理代谢及组织结构，0.10 mg/L Cu²⁺浓度显著影响魁蚶组织中ACP、ALP、GPX和GST的活性。研究结果为认知魁蚶等滩涂贝类对Cu²⁺胁迫的响应机制提供基础数据，为预防滩涂潜在重金属污染风险及生物修复提供参考。

摘要:为研究尼罗罗非鱼肠道和池塘养殖环境中菌群结构变化与链球菌病暴发的相关性，实验采用16S rDNA高通量测序方法对比分析发病和健康池塘水体、底泥和尼罗罗非鱼肠道菌群的结构特征。结果显示，底泥中微生物多样性最高，水体和肠道中微生物多样性次之；肠道菌群与水体中菌群的相似性较高，而与底泥中菌群相似性较低；发病组的尼罗罗非鱼肠道和池塘底泥中微生物的多样性均低于健康组，而发病组池塘水体中微生物多样性高于健康组。OTU聚类分析发现，发病与健康尼罗罗非鱼肠道微生物差异极显著，大部分健康尼罗罗非鱼肠道微生物样品单独聚为一支。菌群结构组成分析结果表明，虽然发病组和健康组水体或底泥中优势菌群结构组成的差异较小，但在非优势菌群中存在一定差异，发病组水体中变形菌门和梭杆菌门的比例显著高于健康组水体，疣微菌门和浮霉菌门的丰度显著低于健康组水体；发病组池塘底泥中厌氧粘细菌属、甲烷丝菌属和枝芽孢菌属等具有降解有机质和生态修复功能，菌群的丰度显著低于健康组底泥，而具有致病能力的曼氏杆菌属丰度却显著高于健康组底泥。发病组尼罗罗非鱼肠道菌群中链球菌属、分枝杆菌属和曼氏杆菌属等致病菌群的丰度显著高于健康组尼罗罗非鱼肠道，而乳球菌属、鲸杆菌属和红球菌属等益生菌的丰度显著低于健康尼罗罗非鱼肠道。无乳链球菌普遍存在于发病和健康养殖环境，以及尼罗罗非鱼肠道中，无乳链球菌的丰度在发病和健康养殖环境之间无显著差异，但其在发病尼罗罗非鱼肠道中的丰度要显著高于健康组。研究表明，尼罗罗非鱼链球菌病发病池塘水体和底泥中有益菌丰度降低和致病菌丰度的升高反映其养殖环境出现恶化，尼罗罗非鱼链球菌病的暴发与肠道微生态平衡破坏后无乳链球菌丰度增加密切相关，但肠道中无乳链球菌丰度的剧增与养殖水体和底泥中该病原菌的丰度水平之间并无直接关联。

摘要:近年来，南极磷虾渔业过于集中于布兰斯菲尔德海峡，这也使得该海区磷虾资源状况及其生态学特征日益受到关注。南极磷虾群具有较为明显的昼夜垂直移动特征，开展此方面的研究可为探索其渔场形成机制提供基础数据，并为磷虾渔业反馈式管理提供参考。基于磷虾渔船上Simrad EK80记录的相关声学数据，使用Echoview软件判别声学数据中的磷虾群体，对2016年秋季布兰斯菲尔德海峡南极磷虾群昼夜垂直移动特征进行分析，并进一步分析影响磷虾群昼夜垂直移动的因素。结果显示，3月和4月磷虾群深度基本维持在250 m以浅，虾群最大深度出现在日升时分的频次最高（22.9%），而最浅深度出现在夜间时分的频次最高（36.0%），同时在日升时分，虾群厚度达到最大值；白天磷虾群多集中在较深水层，夜间会上浮到较浅水层。随着月份的推移，磷虾群平均深度总体呈现加深的趋势。光强和海底深度是影响磷虾群深度变化的2个主要因素。

摘要:以带鱼为原料，通过双酶分步水解制备蛋白酶解液，利用活性炭吸附脱除芳香族氨基酸，紫外和氨基酸组成分析测定高F值寡肽（HFP）的F值，并对昆明小鼠体内的活性进行了系统评价。酶解实验结果显示，带鱼蛋白采用胃蛋白酶和风味蛋白酶进行双酶分步水解，胃蛋白酶的最优酶解工艺参数为酶用量3%，料液比1∶5（g/mL），温度35℃，pH 2.0，酶解时间3 h；风味蛋白酶的最优酶解工艺参数为酶用量3%，pH 7.0，温度50℃，酶解时间3 h。活性炭型号筛选和脱芳工艺研究表明，4号粉末活性炭（200目）优于其他4种活性炭，在料液比1∶20（g/mL）、pH 6.0、常温下处理4 h，蛋液的脱芳率最高，F值（OD₂₂₀/OD₂₈₀）由脱芳前的5.75增加到脱芳后的30.72。制备的带鱼高F值寡肽经氨基酸组成分析验证，F值（支链氨基酸/芳香族氨基酸）为28.06。活性实验结果显示，与对照组相比，高F值寡肽剂量组昆明小鼠的醉酒时间明显延长，醒酒时间显著缩短，力竭游泳时间明显延长，游泳后的剂量组肝糖原和肌糖原含量增加，血清尿素氮和乳酸含量下降，而乳酸脱氢酶活性则明显提高。另外，剂量组小鼠体内的抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT的活性均显著提高，而丙二醛含量则显著减少。本实验为带鱼高F值寡肽的制备提供技术支持，所制备的高F值寡肽对小鼠具有较好的抗醉酒、醒酒、抗疲劳作用和抗氧化活性。

摘要:在传统渔业资源衰退的情况下，龙头鱼等次要的经济种类逐渐成为东海海区的优势种群，具有重要的经济价值和生态地位。根据2015年11月—2016年8月在温州台州外海（120.93°~122.95°E，27.21°~28.97°N）调查采集的2 611尾龙头鱼的生物学数据，用ELEFANⅠ方法对其生长、死亡参数进行估算，并通过不完全β函数渔获量方程动态综合模型确定最适开捕规格，评估种群资源的利用状况。结果显示，温台渔场龙头鱼体长—体质量关系为W=0.000 5L^3.87（R²=0.906 7），雌、雄个体间的体长—体质量关系无显著性差异；龙头鱼的Von Bertalanffy生长方程参数L_∞、K、t₀分别为32.13 cm、0.39和–0.69龄，体质量生长拐点年龄为2.78龄；根据体长组成资料的线性渔获量曲线估算出龙头鱼的总死亡系数2.55，用Pauly经验公式估算出自然死亡系数0.66，捕捞死亡系数1.89和开发率0.74；动态综合模型评估表明，应适当提高开捕年龄，增大开捕体长，最适开捕年龄t_c为1.15龄，相应开捕体长为16.5 cm。

摘要:根据2014年3月在海南三亚湾及湾内东、西琩洲岛获取的9条潮间带断面（3条砂质和6条岩礁）中潮区生物调查数据，分析底质类型对潮间带大型底栖动物生态功能的影响。结果显示，①移动能力弱、掘洞型和滤食性的底栖动物在砂质海滩有较多分布，而不移动、移动能力强、固着型、爬行型以及植食性和捕食性的底栖动物在岩礁海岸分布较多；②主坐标典型性分析（CAP）显示，9条潮间带断面的大型底栖动物可明显分为岩礁和砂质2群，不同底质的潮间带断面大型底栖动物具有不同的性状模式，其中迁移能力、栖息方式和食性是造成其差异的主要原因；③大型底栖动物的香农多样性指数（H'）和功能多样性指数（FD）均呈岩礁潮间带断面高于砂质潮间带断面；④2种底质海滩的大型底栖动物均具有较高的功能冗余，但砂质海滩略高于岩礁海滩。

摘要:实验以计算机模拟的管理策略评价方法为基础，以海州湾海域的银鲳、小黄鱼、大泷六线鱼和长蛇鲻为例，对基于数据有限方法的管理策略进行了分析评价。模拟结果显示，基于体长的管理策略能够在产量和避免过度捕捞间取得较好的权衡，其管理效果优于基于捕捞努力量的管理策略。模拟结果显示，银鲳和大泷六线鱼处于过渡捕捞状态；小黄鱼种群规模具有较大波动和不确定性；长蛇鲻种群未遭受过度捕捞。研究表明，基于有限数据评估方法的管理策略可以有效避免潜在的过度捕捞，提升遭受过度捕捞群体的产卵群体生物量规模，具有较好的可持续性，并能维持可观的产量，在我国具有广泛的运用前景。

摘要:为探讨三角鲂、翘嘴鲌及其杂交子代的生长性能与形态差异，本研究开展了广东东江三角鲂（MT）与长江水系翘嘴鲌（CA）远缘杂交实验，获得了三角鲂♀×翘嘴鲌♂新型鲂鲌杂交F₁优良组合。以团头鲂（MA）♀×翘嘴鲌♂杂交F₁、三角鲂、翘嘴鲌、团头鲂自交子代4个群体为对照，比较分析了MT♀×CA♂杂交F₁的生长性能及形态差异。结果显示，（1）土池同池生长性能在1龄时，MT♀×CA♂、MA♀×CA♂表现出显著的超父本CA杂种优势；2龄时，MT♀×CA♂、MA♀×CA♂表现出显著的超双亲生长优势；3龄时，MT♀×CA♂不仅具显著的超双亲生长优势，且体质量也显著高于MA♀×CA♂。（2） MT♀×CA♂的可数和可量性状多数表现为中间型。可数性状的分析结果显示，MT♀×CA♂臀鳍等多个性状介于父母本之间，平均杂种指数为65.00，接近中间值，略偏向于父本CA。可量性状表明MT♀×CA♂有7个性状分别与父母本有显著性差异，平均杂种指数为51.61，接近理想的中间值。（3）聚类分析显示鲂鲌杂种MT♀×CA♂和MA♀×CA♂聚为一支，MT和MA聚为一支，然后这两支汇聚后与CA聚为一支。主成分分析得到累计贡献率达56.02%的3个主成分，反映了鱼体高、躯干、头部和尾部的形态变异；通过构建5个群体的判别函数进行判别分析，判别准确率为87.1%~100.0%。研究表明，三角鲂（♀）×翘嘴鲌（♂） F₁杂种表现出生长快、形态优等优良性状，有望进一步培育成为优良鲂鲌杂交新品种。

摘要:为进一步补充凡纳滨对虾核心育种群收获体质量的遗传进展工作，设计了包括10个家系数量梯度（100~1 000）和11个家系内测试个体数梯度（100~5 000）的育种方案，利用计算机模拟技术，执行家系间（留种50%家系）和家系内选择（留种1雄、2雌），连续选择19次，比较核心育种群与扩繁群收获体质量育种值和群体近交系数的变化，为进一步优化大规模家系选育提供基础参数。结果显示，与对照方案（家系数量100个、家系内测试个体数100个、体质量遗传力0.35）相比，增加参与测试的家系内个体数，选择强度不断提高，核心育种群收获体质量育种值均值增加了48%（62.75~92.87 g），但增加幅度在不断降低（100~2 500：40.60%；2 500~5 000：7.40%）；核心育种群收获体质量育种值标准差降低了2.90%（1.38~1.34 g）。受限于选择强度，随着家系数量的扩大，核心育种群收获体质量育种值仅增加了1.88%（62.75~63.93 g），育种值标准差增加了4.35%。扩繁群收获体质量育种值随家系规模变化的趋势同核心育种群，但在家系水平上的提高幅度更大（63.63~65.48 g，2.91%）。随着家系数量的增加，核心育种群的近交系数降低了90.32%（0.093~0.009），下降幅度不断减少（100~500：79.57%；500~1 000：10.75%）；家系数量为200个的育种群体，连续选择19次后，每代平均近交率为0.25%。增加参与测试的家系内个体数，不影响核心育种群的近交水平。研究表明，扩大家系内测试个体数，可以进一步提高核心育种群与扩繁群收获体质量的遗传进展。

摘要:通过围隔实验比较罗氏沼虾不同养殖模式对水体浮游生物的影响。实验设置6种养殖模式：罗氏沼虾单养（MP）、罗氏沼虾+浮萍（水面覆盖率5%）（PP）、罗氏沼虾+鲢（PF）、罗氏沼虾+背角无齿蚌+鲢（PMF）、罗氏沼虾+背角无齿蚌+浮萍（PMP）、罗氏沼虾+背角无齿蚌+浮萍+鲢（PMPF）。养殖64 d后，测定不同模式中浮游植物和三大类浮游动物（轮虫、枝角类及桡足类）的种类和数量。结果显示，上述6种模式中浮游植物共同优势种有4种，但优势度指数最大的浮游植物不同，MP组是锥囊藻属，有浮萍的PP和PMP组均为细小平裂藻，混养鲢的PF、PMF和PMPF组均为针杆藻。不同养殖模式无共同的浮游动物优势种。养殖模式对浮游生物密度具有显著影响，PF组浮游植物密度最高，MP组浮游植物密度最低，PF组浮游植物密度比MP、PP和PMP组分别高78%、53%和61%。相反，浮游动物密度MP组最高，PF组最低。混养鲢的PF、PMF和PMPF组浮游动物密度显著低于其他3组。研究表明，罗氏沼虾养殖中混养鲢可增加浮游植物密度而降低浮游动物密度，浮萍和鲢影响池塘优势种。

摘要:为获得鱼源益生乳酸菌，本研究从健康鲫肠道内分离鉴定得到38株乳酸菌，并选择其中8株乳酸菌进行体外益生特性分析。结果显示，8株乳酸菌均能在pH=4.5和10%鲫胆汁环境中存活，对嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、无乳链球菌和副溶血弧菌均有较强的抑菌能力，但菌体表面疏水性和自凝集能力具有菌株特异性。选择5株疏水性较高（63%~89%）、自凝集能力强（37%~45%）的乳酸乳球菌进行体外黏附能力测定，结果显示，黏附能力在菌株间具有差异性（4.5%~7.9%），但均能显著降低嗜水气单胞菌NJ-35的体外黏附率，黏附抑制率达30%~35%；最后对筛选出的3株高黏附力的乳酸乳球菌进行安全性评价，发现3株菌对鲫均无致病力。鱼源乳酸菌的筛选，为鲫养殖生产中益生菌的实际应用提供了理论依据。