摘要:

摘要:为了解金钱鱼促性腺激素受体基因（GtHRs）在金钱鱼性腺发育中的作用，采用反转录PCR（Rt-PCR）与cDNA末端快速克隆（RACE）首次克隆了金钱鱼卵泡刺激素受体（FSHR）和促黄体生成素受体（LHR）的cDNA序列全长。FSHR的cDNA全长2538 bp，编码702个氨基酸，LHR的cDNA全长3315 bp，编码722个氨基酸，它们都含有属于糖蛋白激素受体（GHR）家族的典型跨膜螺旋结构区域（TM helix）。同源性分析显示金钱鱼GtHRs与欧洲鲈的相似性最高，且GtHRs在进化中具有一定的保守性。性腺不同时期表达分析表明，在卵巢Ⅰ期时，FSHR高水平表达，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期时在较低水平表达。在精巢中，FSHR的表达水平在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期逐渐升高并在Ⅲ期达到最高，Ⅳ期开始下降。LHR在金钱鱼卵巢和精巢的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期低水平表达，在Ⅳ期表达水平达到最高。研究表明，FSHR在金钱鱼性腺发育早期扮演重要作用，LHR与卵子和精子的成熟有关。

摘要:为研究褐点石斑鱼不同月龄形态性状的生长规律特征及形态性状对体质量的影响，采用主成分分析和通径分析方法对3月龄、8月龄和13月龄褐点石斑鱼个体全长（X₁）、体长（X₂）、头长（X₃）、体宽（X₄）、体高（X₅）、尾柄高（X₆）、眼径（X₇）、眼后头长（X₈）和体质量（Y）9个性状进行分析。结果显示，（1）不同月龄褐点石斑鱼各形态性状对体质量的相关系数均达到极显著水平，不同月龄相同形态性状与体质量的相关性存在差异。（2）各月龄第一主成分均指向褐点石斑鱼的生长发育情况；第二主成分均指向眼睛发育情况；但3月龄、8月龄和13月龄第三主成分分别指向尾部发育、体宽发育及体高发育。（3）3月龄阶段，全长、体高、体宽及尾柄高对体质量的直接通径系数达到显著水平；8月龄阶段，全长、体宽、尾柄高及眼后头长对体质量的直接通径系数达到显著水平；13月龄阶段，全长、体高、体宽及体长对体质量的直接通径系数达到极显著水平，并建立了3个月龄组的不同形态性状对体质量最优回归方程。（4）褐点石斑鱼3~13月龄阶段的体长（L）与体质量（W）的关系为W=0.0378L^2.873（R²=0.9596），说明该阶段生长属于等速生长。研究表明，在褐点石斑鱼的不同生长阶段，各形态性状对体质量的影响有所不同，建议以全长（3~13月龄）作为育种工作的目标性状，为褐点石斑鱼早期生长发育阶段的选择育种工作和测量指标提供科学依据。

摘要:为探究Tyrosinase（Tyr）基因在黄河鲤体色形成中的作用，利用生物显微镜对黄河鲤黑色鳞片、银色鳞片、鳍条色素细胞的组成进行观察，并利用RACE克隆黄河鲤Tyr基因全长cDNA序列，荧光定量PCR分析其在不同组织中的表达情况，Western blot印迹和免疫组织化学方法检测其蛋白的表达定位。结果显示，黄河鲤具有黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞3种色素细胞，3种色素细胞的数量、种类和分布在不同组织中存在较大差异。黄河鲤Tyr基因cDNA全长1717 bp（GenBank ID：No.KY305667），其中ORF长1605 bp，编码535个氨基酸，5'-UTR区41 bp，3'-UTR区71 bp。蛋白同源分析发现，黄河鲤Tyr与鲤科鱼类相似性最高，与哺乳类及鸟类等脊椎动物相似性最低。系统进化分析显示，黄河鲤Tyr与鲤、瓯江彩鲤、锦鲤和斑马鱼等鲤科鱼类的亲缘关系最近。实时定量PCR分析表明，Tyr基因在黄河鲤不同组织中均有表达，肌肉中的表达量最高，其次是黑色皮肤，另外在黄色皮肤、臀鳍和尾鳍等黑色素细胞存在的组织中也有较高表达。Western blot印迹结果显示，Tyr基因在黑色皮肤中表达最高，其次是臀鳍和尾鳍，银色皮肤中没有表达。免疫组织化学结果显示，Tyr基因在黑色皮肤的黑色素细胞和黏液细胞中有表达。研究表明，Tyr基因表达水平与黑色素细胞数量和分布具有一定相关性，参与黄河鲤体色的形成。

摘要:为研究底部充氧对养殖系统上覆水—泥水界面—沉积物间隙水中离子垂直分布的影响，在室内条件下构建模拟装置，设充氧组（实验组）和未充氧组（对照组），每组4个平行，利用Peeper技术分别采集各装置中第0、1、4和7天，上覆水—泥水界面—沉积物间隙水整个垂直剖面的原位水样，然后应用微量分光光度法测定样品中的NH₄⁺-N、NO₃^--N、NO₂^--N、PO₄^3--P和SO₄^2--S浓度。结果显示：（1）短期充氧对NH₄⁺-N在上覆水和沉积物间隙水中的垂直分布特征影响不显著；（2）充氧可使沉积物上覆水和表层沉积物（0~2 cm）间隙水中的NO₃^--N浓度大幅升高；（3）硝化作用的中间产物NO₂^--N，由于不能和氧气大量共存，其平均浓度的最大值由未充氧前出现在上层上覆水，逐渐转变为在表层沉积物1 cm深处；（4）充氧促进了沉积物对PO₄^3--P的吸附和固定，显著降低了其在上覆水和表层沉积物（0~2 cm）间隙水中的浓度；（5）充氧通过化学和生物途径氧化了系统中还原性含硫物质，大幅升高了上覆水和表层沉积物（0~2 cm）间隙水中的SO₄^2--S的浓度；（6）主成份分析（PCA）表明，持续充氧1、4和7 d显著改变了上覆水的理化性质，其中第4天和第7天的数据与对照组差异最大，相对于上覆水，充氧对沉积物间隙水的总体影响不显著。研究表明，底部充氧可降低引起池塘富营养化PO₄^3--P的浓度，提高了氧化性离子NO₃^--N、NO₂^--N和SO₄^2--S的浓度，显著改变了上覆水和表层沉积物间隙水的理化性质，是养殖池塘水质调控和环境修复的一种有效方法。

摘要:(鱼师)鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原，可导致鱼类慢性系统性肉芽肿疾病。(鱼师)鱼诺卡氏菌全基因组序列分析发现了一个酪氨酸蛋白磷酸酶（protein tyrosine phosphtase，PTP）基因，生物信息学分析显示该基因很可能编码一个靶向定位于宿主细胞线粒体的分泌蛋白。本实验对(鱼师)鱼诺卡氏菌PTP进行了基因克隆、分泌蛋白鉴定、亚细胞定位、过表达和线粒体膜电位检测，结果显示，在(鱼师)鱼诺卡氏菌胞外产物中质谱鉴定到了PTP肽段，证实其为分泌蛋白。亚细胞定位研究观察到PTP-GFP融合蛋白均匀地分布在FHM细胞中，与线粒体分布不重合，说明(鱼师)鱼诺卡氏菌PTP蛋白并未靶向定位于线粒体。亚细胞定位和过表达研究都显示PTP蛋白在FHM细胞中表达后，细胞核出现固缩浓染、凋亡小体等明显的细胞凋亡特征。通过线粒体膜电位检测表明，在pcDNA-PTP转染后48 h，线粒体跨膜电位被明显破坏，说明(鱼师)鱼诺卡氏菌PTP很可能是一种可诱导细胞凋亡的细菌蛋白。通过对(鱼师)鱼诺卡氏菌PTP开展基因克隆和功能初步研究，为进一步揭示该基因的功能和深入了解(鱼师)鱼诺卡氏菌的分子致病机理奠定了基础。

摘要:研究锌离子胁迫对海洋小球藻生长和金属硫蛋白诱导的影响，当小球藻达到对数生长期，用不同离子浓度（5、10、20、50和100 μmol/L）的锌盐（氯化锌、柠檬酸锌、乙酸锌和葡萄糖酸锌）分别进行胁迫培养，通过测定小球藻的生物量和锌结合金属硫蛋白含量，考察锌胁迫对海洋小球藻的生物量、热稳定蛋白含量以及锌结合金属硫蛋白含量的影响。结果显示，当浓度分别小于5和10 μmol/L时，柠檬酸锌和氯化锌对小球藻生长无显著抑制作用；而浓度为5 μmol/L时，乙酸锌和葡萄糖酸锌对小球藻生长即产生显著抑制，且抑制作用皆随锌离子浓度的增加而增大。与对照组相比，4种锌盐胁迫3 d后小球藻产生的热稳定蛋白含量极显著增加，其中以锌离子浓度为50 μmol/L的葡萄糖酸锌对小球藻胁迫产生的热稳定蛋白含量最高，达到34.5 mg/g（湿藻泥）。同样在此浓度的葡萄糖酸锌胁迫下，小球藻诱导产生的锌结合金属硫蛋白的含量最高。研究表明，用锌离子浓度为50 μmol/L的葡萄糖酸锌对小球藻胁迫培养，诱导产生的锌结合金属硫蛋白含量达到最高。

摘要:采用原核表达获得草鱼白细胞介素-8（IL-8）重组蛋白，并以腹腔与皮下组织交替注射的方法免疫小鼠，制备抗草鱼IL-8的多克隆抗体。采用免疫印迹（Western blot）和酶联免疫吸附（ELISA）技术检测抗体的特异性与效价，运用流式细胞术分析健康草鱼及细菌脂多糖（LPS）刺激后草鱼各免疫相关组织中IL-8的表达特征。结果显示，草鱼IL-8多克隆抗体效价可达1∶40 000。健康草鱼的胸腺、头肾、肝脏、肠道、鳃、脾脏、体肾等组织均表达IL-8蛋白，其中，头肾和鳃中表达量较高。LPS刺激后，各组织IL-8蛋白表达量均显著升高，其中，肠道、肝脏、肾脏在LPS刺激4 h后IL-8蛋白上调达最高峰，头肾、脾脏、鳃于LPS刺激后12 h时表达量最高，胸腺则在24 h时达最高峰。研究表明，IL-8参与了草鱼炎症应答；IL-8表达量的升高，可作为早期炎症监测指标，应用于养殖鱼类炎症性疾病的预警指标。

摘要:采用生化分析手段对合方鲫及其亲本的肌肉营养成分进行比较研究。结果显示，合方鲫肌肉中水分含量为71.00%，显著低于其亲本的水分含量（日本白鲫：75.60%，红鲫：75.50%），说明合方鲫具有低水分的特征。合方鲫的蛋白质含量为17.70%，高于红鲫的蛋白质含量（17.00%），且显著高于日本白鲫的蛋白质含量（14.80%）。在15种检测的氨基酸含量中，合方鲫的氨基酸总量（15.87%）、必需氨基酸总含量（6.55%）均高于红鲫的氨基酸总量（15.52%）和必需氨基酸总含量（6.46%），且显著高于日本白鲫的氨基酸总量（13.13%）和必需氨基酸总含量（5.27%）。值得一提的是合方鲫的呈味氨基酸总含量高达6.26%，高于红鲫的呈味氨基酸总含量（6.07%），且显著高于日本白鲫的呈味氨基酸总含量（5.29%）。研究表明，合方鲫是一种营养价值高、肉味鲜美的鱼类，为其生产上的应用提供了理论支撑。

摘要:甘露糖受体（MR）隶属凝集素超家族，主要表达于巨噬细胞和未成熟的树突状细胞表面。MR不仅在先天免疫防御中发挥重要作用，还通过参与抗原呈递，激活T淋巴细胞，启动获得性免疫应答过程。本研究采用同源克隆技术获得黄颡鱼甘露糖受体（pfMR）基因，采用荧光定量PCR技术检测MR在正常黄颡鱼体内的分布情况，采用鮰爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞和甘露聚糖封闭MR方法研究黄颡鱼MR在抗细菌感染中的作用。结果显示，pfMR同团头鲂、草鱼、斑马鱼和尼罗罗非鱼的MR聚为一支。pfMR在所检测的12个组织中均有分布，其在肾脏、脾脏和肌肉组织中表达量较高，在血液中表达量较少。鮰爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞后，pfMR、IL-1β和TNF-a均被细菌诱导表达，超氧阴离子和一氧化氮的含量也上升，超氧阴离子在感染30 min后即显著上升，一氧化氮在感染12 h后才显著上升。甘露聚糖竞争结合MR，显著抑制巨噬细胞内化GFP标签的鮰爱德华菌，加入EDTA减少内化的荧光强度，加入Ca²⁺使内化的荧光强度回升。研究表明，黄颡鱼头肾巨噬细胞MR参与鮰爱德华菌的识别和内吞过程，而且依赖Ca²⁺。

摘要:为探讨广泛存在于近海环境中海洋弧菌和贝类附着的相互作用关系，实验从自然微生物被膜和厚壳贻贝成体肠道内分离了海洋弧菌，测定其种属及亲缘性，调查了这些不同来源弧菌形成的微生物被膜与厚壳贻贝稚贝附着的调控作用。结果显示，测试弧菌形成的微生物被膜密度随着初始细菌密度的增加呈现不同程度的增加。源于自然微生物被膜和贻贝肠道内的10株弧菌均能显著促进厚壳贻贝稚贝的附着，不同菌株形成微生物被膜的诱导活性存在显著差异，附着率变化范围为17%~67%，其中稚贝在Vibrio sp.17微生物被膜上的附着率为67%±2%。微生物被膜对稚贝附着诱导活性与被膜密度呈显著相关性，其中弧菌V.crassostreae ECSMB14106的相关性系数最高，为0.8992。此外，微生物被膜的诱导活性与弧菌的来源无关。本实验初步探明了海洋弧菌对厚壳贻贝稚贝附着的影响，有助于进一步理解微生物被膜调控厚壳贻贝的附着分子机理。

摘要:为研究三角帆蚌HcTyr基因与内壳色性状的相关性，本实验根据已分离的三角帆蚌HcTyr基因进行引物设计和片段扩增，并用144只三角帆蚌对其多态性进行筛选和验证，卡方检验分析了SNP位点和三角帆蚌内壳色相关性，并对HcTyr基因进行了图谱定位。结果显示，在HcTyr基因上筛选出8个SNP位点，其中有7个SNP位点与三角帆蚌内壳色L、a及dE呈显著相关性，用这7个SNP位点做单倍型构建和分析，发现Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ这3种单倍型在白色群体中出现的频率极显著高于在紫色群体中出现的频率，而Ⅴ和Ⅶ这2两种单倍型在紫色群体中出现的频率极显著高于白色群体。进一步在商业养殖群体中验证发现，Ⅳ和Ⅶ这2种单倍型可分别作为白色和紫色群体的优势单倍型。研究表明，三角帆蚌HcTyr基因可作为内壳色相关的候选基因，其部分SNP位点可用于三角帆蚌分子辅助育种。另外本实验还将HcTyr基因定位在三角帆蚌LG16连锁群上，这为进一步解析该基因调控珍珠颜色形成的分子机制奠定了基础。

摘要:黏膜及其表面的共生菌群是鱼类抵御外界不利环境的第一道屏障。为探索养殖罗非鱼表皮和鳃黏膜共生菌菌群的结构特征是否与其健康状况间存在相关关系，本研究运用高通量测序技术，以无乳链球菌腹腔注射攻毒48 h后存活和濒死尼罗罗非鱼为检测对象，检测攻毒前后罗非鱼表皮和鳃黏膜共生菌群落结构差异。结果显示，健康尼罗罗非鱼表皮和鳃黏膜共生菌均存在优势菌群，主要为特吕珀菌属、硫杆菌属、弓形杆菌属、海单胞菌属和弧菌属。人工感染无乳链球菌后存活尼罗罗非鱼表皮和鳃黏膜共生菌菌群与感染前无显著差异；与存活组相比，濒死尼罗罗非鱼的表皮和鳃黏膜共生菌菌群多样性下降，其中弓形杆菌属、假交替单胞菌属、海单胞菌属、假单胞菌属和弧菌属等含量显著下降，链球菌属含量占总菌群的55.30%±1.24%，表明养殖尼罗罗非鱼表皮和鳃黏膜共生菌群落结构可能与其健康状况相关。

摘要:粪卟啉原Ⅲ氧化酶（coproporphyrinogen-Ⅲ oxidase，CPOX）是卟啉类化合物合成过程中的关键酶，而卟啉是形成机体色素的重要化合物。采用RACE方法克隆获得文蛤粪卟啉原Ⅲ氧化酶基因（MmCPOX）的cDNA序列，该序列全长1490 bp，其中开放阅读框1173 bp，编码390个氨基酸，预测分子量为12.04 ku，理论等电点为5.05；预测该酶含有跨膜结构域和Coprogen-oxidas结构域；从构建的系统进化树来看，软体动物门的文蛤、加州海兔和太平洋牡蛎首先聚在一起，显示出较近的亲缘关系。qRT-PCR结果显示，MmCPOX基因在文蛤早期发育的各个时期均有表达，但在D形幼虫期以后表达量显著升高；在文蛤成贝的7个组织中，外套膜和血液中表达量显著高于其他组织，表明其与血卟啉合成和壳色卟啉形成相关；在不同壳色文蛤中，红壳文蛤、暗纹文蛤、细纹文蛤的外套膜中表达量显著高于黑斑文蛤和白壳文蛤，表明其参与形成红色和褐色壳色。

摘要:采用侧扫声纳系统，对大连市金州湾蚂蚁岛海域中A、B两个石料人工鱼礁区进行调查评估，将声学方法应用到石料礁堆体积估算中，目的是探究石料礁堆体积估算的新方法，提高计算结果的准确性，进而提高工作效率。使用侧扫声纳系统进行数据采集，通过相关数据处理软件和计算机辅助技术对声纳数据进行后处理，提取石料礁堆特征图像，结合函数曲线对石料礁堆体积进行估算。结果显示，侧扫声纳图像能够清晰反映石料礁在海底的分布状态，根据图像能够对石料礁的冲淤程度进行判别，利用几何关系及相关技术手段对石料礁堆体积进行估算，估算结果存在一定误差，通过多次不同角度的检测或配合其他辅助软件能尽可能减小误差。在A石料礁区，运用积分断面法估算的石料礁堆体积与该礁区投放纪录的实际体积相比，相对误差接近16%；对B石料礁区进行检测评估，所得石料礁堆体积与实际体积之间的相对误差也接近16%。两个石料人工鱼礁区所估算的体积与实际体积相差均很少，虽然两个礁区物理环境以及石料礁堆大小均不同，但二者相对误差接近且均小于20%，验证了积分曲线的合理性。因此，在诸多不确定因素的影响下，该方法可相对精确地估算石料礁堆体积，可为人工鱼礁区建设、管理和评价提供支持和依据。

摘要:为了筛选不同高光光强胁迫下坛紫菜中表达水平最为稳定的内参基因，本研究采用qRT-PCR技术测定了植物中常用的6种内参基因UBC、TUB、18S、EF2、ACT和GAPDH在不同光照强度下培养的坛紫菜藻体中的绝对表达水平，并采用比较Ct值法、GeNorm、Bestkeeper和NormFinder软件分析4种方法对6种候选内参基因的表达稳定性进行评估。结果显示，UBC的Ct值变化范围最小，18S的Ct值变化范围最大；geNorm软件分析结果显示最稳定的内参基因为UBC和EF2；Bestkeeper和NormFinder软件分析结果类似，UBC基因的稳定值M均为最低值（分别为0.044和0.80），说明其表达水平最稳定。研究表明，UBC基因可以作为不同光照条件下坛紫菜基因表达qRT-PCR分析的最适内参基因。

摘要:为研究日本海马野生群体的种质资源及遗传多样性状况，实验采用PCR扩增法获得日本海马线粒体DNA的控制区序列片段，同时利用GenBank数据库中已有的14种海龙科鱼类控制区同源序列对其进行序列比较及系统进化分析。结果显示，日本海马控制区序列片段长度为557~558 bp，其A、T、G、C 4种碱基的平均含量分别为34.3%，29.7%，14.1%，21.9%。在控制区序列片段中，共检测到16个多态性核苷酸位点，定义了16种单倍型，其核苷酸多态度和单倍型多态度都较低（π=0.0032±0.0021，h=0.70±0.02）。利用GenBank数据库中已有的海马控制区同源序列，采用邻接法、最大似然法和贝叶斯法构建了分子系统树。结果显示，采用最大似然法和贝叶斯法构建的分子系统树拓扑结构与邻接法构建的分子系统树拓扑结构不完全相同但基本一致，系统进化分析结果与形态分类学的观点一致。研究表明，线粒体DNA控制区序列在海龙科不同阶元间变异较大，适合于海龙科鱼类种间、群体水平的研究以及作为系统进化分析的分子标记。

摘要:利用60对微卫星分子标记分别对罗氏沼虾3个养殖群体进行遗传多样性分析，通过比较样本量及标记量对遗传多样性指标的影响，探讨最适宜的样本量及标记量。结果显示，样本量和标记量的大小均对遗传多样性指数有较大的影响，其中样本量与平均等位基因数和平均有效等位基因数呈高度正相关，与杂合度和Nei氏遗传多样性指数分别呈中度、高度相关，样本量为10~30时，遗传参数变化差异显著，样本量大于30，变化差异不显著；标记量与遗传参数也存在不同程度的相关性，标记量为5~25时，各遗传多样性指数变化有明显差异，标记量大于25时，各遗传参数变化较小，多态信息含量不同的标记直接影响到群体遗传参数。性别对群体遗传多样性指标无显著性影响。研究表明，应尽可能选择多态信息含量高的微卫星分子标记开展罗氏沼虾群体遗传多样性分析，可不考虑样本性别，样本量不宜小于30，标记量不宜少于25。

摘要:为检验SCP3在无脊椎动物中是否可以标记特定的生殖细胞，实验利用RACE技术克隆了栉孔扇贝SCP3（Cf-SCP3）的全长cDNA序列，结果显示，其长度为1 033 bp，开放阅读框为726 bp，编码241个氨基酸。推导的氨基酸序列中包含SCP3保守的Cor1结构域和卷曲螺旋结构域。制备了Cf-SCP3地高辛标记的RNA探针和Cf-SCP3重组蛋白的多克隆抗体，采用原位杂交和免疫组织化学技术检测其细胞学定位，结果显示Cf-SCP3转录本和Cf-SCP3蛋白均特异性地定位在栉孔扇贝的初级精母细胞和未受精卵中，在精巢的其他类型细胞和卵巢中均未见表达信号。研究表明，Cf-SCP3蛋白可能与脊椎动物的SCP3蛋白一样，作为联会复合体的组成成分参与栉孔扇贝的配子发生，同时可以作为一个栉孔扇贝初级精母细胞的分子标记应用到体外诱导生殖细胞分化的研究。