• 2015年第39卷第7期文章目次
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    • 四个舌鳎育种群体表型性状及线粒体COⅠ和Cyt b基因比较分析

      2015, 39(7):929-941. DOI: 10.11964/jfc.20141209616

      摘要 (3196) HTML (0) PDF 5.04 M (2263) 评论 (0) 收藏

      摘要:对半滑舌鳎、黑鳃舌鳎和短吻三线舌鳎2个自然群体(Ca1和Ca2)的21个可量性状进行了测定,利用单因素方差分析(One-Way ANOVA)和Student-Newman-Keuls多重比较法,对21个可量性状进行分析和比较。结果发现,短吻三线舌鳎2个群体之间无显著性差异性状达71.43%,半滑舌鳎与短吻三线舌鳎具有显著性差异性状达71.43%,黑鳃舌鳎与短吻三线舌鳎具有显著性差异性状达66.67%~71.43%,半滑舌鳎与黑鳃舌鳎具有显著性差异性状达57.14%。对4个舌鳎群体线粒体(mtDNA)细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(COⅠ)和细胞色素b(Cyt b)基因进行克隆,在GenBank上未发现与黑鳃舌鳎同缘的COⅠ和Cyt b序列,说明黑鳃舌鳎COⅠ和Cyt b基因是首次被克隆,登录号分别为JQ937270 and JQ937271。3种舌鳎的COⅠ和Cyt b基因碱基含量分析显示,G含量最低,T含量均为最高,并且AT含量要高于GC。利用COⅠ和Cyt b序列分别检测舌鳎4个群体种内、种外遗传距离,并构建的NJ系统进化树,结果显示:半滑舌鳎与黑鳃舌鳎遗传距离分别为0.047~0.050和0.045,半滑舌鳎与短吻三线舌鳎分别为0.129~0.132和0.161~0.166,黑鳃舌鳎与短吻三线舌鳎分别为0.123~0.126和0.162~0.172,短吻三线舌鳎种内外遗传距离分别为0.002和0.002~0.004,半滑舌鳎与黑鳃舌鳎亲缘关系较近,它们与短吻三线舌鳎的亲缘关系较远,短吻三线舌鳎种内分化未达到种群分化的程度。研究表明,COⅠ和Cyt b基因完全可作为3种舌鳎种质鉴定的DNA条形码。

    • 脊尾白虾EcR基因的克隆及其在卵巢和胚胎发育过程中的表达分析

      2015, 39(7):942-952. DOI: 10.11964/jfc.20141009522

      摘要 (2952) HTML (0) PDF 1.70 M (2685) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解蜕皮激素受体(EcR)在脊尾白虾卵巢和胚胎发育中的作用,采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾EcR基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KC506600),用实时荧光定量PCR方法分析了EcR基因在雌虾不同组织、卵巢以及胚胎发育不同时期的表达特征。结果显示,脊尾白虾EcR基因全长2 638 bp,开放阅读框1 713 bp,编码570个氨基酸,脊尾白虾EcR在系统进化上与行抱卵繁殖的真虾类和蟹类亲缘关系较近,而与对虾类较远。脊尾白虾EcR基因在各组织中均有表达,但主要在肝胰腺内表达。在脊尾白虾繁殖期内,肝胰腺内EcR的表达量始终高于卵巢,表达量峰值出现在卵巢成熟时期,而卵巢内EcR的表达量在卵巢成熟前期达到最大,两种组织中EcR表达量与卵黄蛋白原(Vg)质量浓度变化趋势相一致。随着胚胎发育,EcR表达量呈先上升后下降趋势,在原肠期达到最大,前溞状幼体期和溞状幼体Ⅰ期的表达量虽有下降,但仍保持较高水平。结果表明,脊尾白虾EcR基因系统进化方向与虾蟹类不同繁殖方式相吻合,其mRNA主要在肝胰腺内表达;卵巢发育过程中,EcR基因参与了肝胰腺和卵巢中Vg合成,其在肝胰腺中表达量变化与性腺发育指数变化趋势一致,对卵巢成熟有重要作用;在胚胎发育过程中,EcR基因参与了胚胎细胞分化及器官形成。

    • 脊尾白虾线粒体基因组应答饥饿的甲基化特征分析

      2015, 39(7):953-961. DOI: 10.11964/jfc.20141209604

      摘要 (2885) HTML (0) PDF 3.71 M (2003) 评论 (0) 收藏

      摘要:为研究脊尾白虾应答饥饿的线粒体基因组表观遗传学特征,本研究在筛选适宜脊尾白虾线粒体基因组甲基化位点分析的BSP引物基础上,对不同饥饿期该虾线粒体基因组的甲基化特征进行了分析。共设计覆盖脊尾白虾线粒体全基因组序列的BSP引物51对,经验证其中10对引物可用于脊尾白虾线粒体基因组的甲基化特征分析,选用其中具有稳定扩增产物的5对引物分别对饥饿10、20和30 d的脊尾白虾线粒体基因组的甲基化特征进行了分析,结果表明,脊尾白虾耐受饥饿的平均死亡时间为19.8 d,最长耐受时间为48 d,在不同饥饿阶段线粒体基因组均可发生甲基化现象,且在第10天时甲基化比例最高,而第20和30天时甲基化比例反而降低;甲基化主要发生在ND基因位点上,据此推测这种甲基化可能用来调节能量代谢相关的电子传递链过程。本研究首次揭示了脊尾白虾线粒体基因组存在甲基化现象,为展开虾类线粒体基因组表观遗传学研究奠定了理论基础。

    • 三角帆蚌EFCB1基因cDNA序列克隆及表达研究

      2015, 39(7):962-970. DOI: 10.11964/jfc.20141109580

      摘要 (2907) HTML (0) PDF 6.32 M (1826) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了发掘更多三角帆蚌具有EF-hand结构域的功能基因及其蛋白质,本研究运用RACE-PCR技术,克隆得到了三角帆蚌包含EF-hand结构域钙结合蛋白1基因(EF-hand calcium-binding domain-containing protein 1,EFCB1)的cDNA全长并进行了生物信息学分析;通过real-time Q-PCR技术,分析了EFCB1基因在三角帆蚌10个组织,以及内脏团、外套膜插核后不同时间点的时空表达特点。结果表明三角帆蚌EFCB1基因cDNA序列全长981 bp,ORF为531 bp,编码176个氨基酸残基,5'-UTR 239 bp和3'-UTR 211 bp。EFCB1分子式为C877H1348N238O270S10,分子量约19.9 ku,等电点为4.70,不稳定系数为62.65,属亲水蛋白。其序列无信号肽序列,存在1个跨膜区域和2个EF-hand结构域,EF-hand模块分别为DLNDDKLISPEE(98-109)和DTNGDDKLDGEE(129-140)。荧光定量结果显示三角帆蚌EFCB1基因在各组织中均有表达,其中在肠和鳃中表达量最高(P<0.05),外套膜中表达量显著高于内脏团(P<0.05)。EFCB1基因在插核后不同时期的外套膜和内脏团育珠部位组织中表达具有显著差异(P<0.05),在外套膜中的表达量均显著高于内脏团(P<0.05),在插核后第20 天时表达量显著高于各时期(P<0.05)。研究表明,EFCB1在三角帆蚌Ca2+的吸收过程中发挥调节作用,在珍珠囊形成过程中以及珍珠形成初期具有重要功能。

    • 热休克及菌胁迫对厚壳贻贝HSP70基因表达的影响

      2015, 39(7):971-977. DOI: 10.11964/jfc.20150209724

      摘要 (3468) HTML (0) PDF 1.58 M (2366) 评论 (0) 收藏

      摘要:70 ku的热激蛋白(HSP70)具有细胞内分子伴侣和细胞外免疫调节功能,是受到热激、重金属、干旱、疾病、寄生虫感染等条件胁迫后产生的诱导蛋白。本实验利用同源克隆法,获得厚壳贻贝HSP70基因1 700 bp的核心序列,BLAST比对和系统进化分析显示,该序列与已知的双壳贝类相应分子高度同源,其中与紫贻贝HSP70基因相似性高达96%,在进化树中两者位于同一分支。37 ℃热激后,厚壳贻贝肝胰腺和鳃中HSP70基因的表达快速上调,2 h即达到对照组30倍,随后持续上升,肝胰腺中最高表达量达到对照组100倍,说明厚壳贻贝HSP70分子为典型的热诱导蛋白。鉴于大肠杆菌及枯草芽孢杆菌是水体中常见微生物,进一步利用实时荧光定量PCR技术检测上述两种细菌感染后,HSP70基因在厚壳贻贝鳃和肝胰腺中的表达水平,结果显示,两种细菌均可引起厚壳贻贝鳃和肝胰腺的HSP70基因表达上升,但大肠杆菌诱导效应显著,8 h时表达量达到最高,鳃为对照组的4倍,肝胰腺为4.5倍,随后逐渐下降,到48 h已恢复到原始水平;枯草芽孢杆菌刺激后,肝胰腺组织中最高表达量在刺激后6 h约为对照组2.5倍,与注射PBS的效果相差不大,鳃组织的响应较肝胰腺组织明显,表达量缓慢升高,8 h达到最高,为对照组4倍,随后迅速下降,直至生理水平。研究表明,厚壳贻贝HSP70分子在调节环境胁迫及宿主免疫防御中具有重要功能。

    • 马氏珠母贝基质金属蛋白酶基因MMP-17的克隆及表达分析

      2015, 39(7):978-988. DOI: 10.11964/jfc.20150109686

      摘要 (2601) HTML (0) PDF 2.90 M (1971) 评论 (0) 收藏

      摘要:基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)是一种能够降解细胞外基质的蛋白水解酶。MMP-17是一种膜型基质金属蛋白酶,通过糖基磷脂酰肌醇连接于细胞表面,参与调控有机体的内环境稳定、宿主防御等多种生理过程。为研究MMP-17在马氏珠母贝免疫反应中的作用,实验运用RACE技术,克隆得到马氏珠母贝MMP-17(Pinctada martensii MMP,Pm-MMP-17)基因cDNA 全长序列,并对其序列特征及功能进行初步分析。结果显示,Pm-MMP-17基因cDNA全长2 794 bp,开放阅读框(ORF)为1 923 bp,编码640个氨基酸,5'UTR长156 bp,3'UTR长715 bp,分子量约为73.11 ku,等电点为8.98;多序列比对和系统进化树分析表明,Pm-MMP-17与其他物种的MMP具有较高的保守性,与长牡蛎的MMP-17相似性高达82%;功能结构域分析表明,Pm-MMP-17有5个高度保守的结构区域:N-末端的信号肽、前导区、催化区、铰链区和C-末端的类血红素结合蛋白区;荧光定量数据分析表明,Pm-MMP-17基因在马氏珠母贝的闭壳肌、珍珠囊、足、外套膜、血淋巴、肝胰腺、性腺、鳃等8个组织中均有表达,在血液中的表达量最高,闭壳肌和鳃次之;脂多糖(LPS)刺激后,Pm-MMP-17基因表达水平上调,12 h后达到最大值,之后又逐渐下调并恢复到正常水平。研究表明,Pm-MMP-17基因可能在马氏珠母贝的免疫反应中起着重要作用。

    • 中华绒螯蟹中肠和后肠内AchE和NOS神经元的观察以及 Ach、NO含量和Na+,K+-ATP活性的分析

      2015, 39(7):989-997. DOI: 10.11964/jfc.20150209704

      摘要 (2533) HTML (0) PDF 41.29 M (1737) 评论 (0) 收藏

      摘要:对中华绒螯蟹中肠和后肠肠壁分别进行分层铺片,应用乙酰胆碱酯酶(AchE)和NADPH-黄递酶组织化学染色方法分别观察中肠和后肠中AchE和一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的分布和形态,并对其相应递质乙酰胆碱(Ach)和一氧化氮(NO)的含量和Na+,K+-ATP酶活性进行测定。结果显示:①对所获得铺片进行形态学观察发现,中肠肌层较后肠薄,肌纤维较细,肌纤维间隔明显;肠道黏膜下层细胞分布密集,后肠黏膜下层细胞分布较中肠更为密集。②AchE和NOS阳性神经元广泛分布于中肠和后肠的黏膜下层,而肌层和基膜未见分布,两种神经元在后肠黏膜下层的分布均较中肠密集。AchE阳性产物为棕色沉淀,阳性神经元大小为3~10 μm,中肠中AchE形态多样,多为圆形、卵圆形或梭形;后肠胞体阳性神经元呈圆形或者椭圆形,无明显胞突。NOS阳性产物为蓝色沉淀,阳性胞体的大小不等,呈不同形态,少量细胞有胞突伸向邻近细胞,中肠阳性神经元多呈条状或点状分散分布,而后肠阳性神经元常呈块状分布。③中肠Ach和NO含量分别为(1.28±0.41)和(1.84±0.25)μg/mg prot,显著低于后肠Ach(1.62±0.27) μg/mg prot和NO(2.10±0.25) μg/mg prot,而Na+,K+-ATP活性在中肠为(1.12±0.17)μmol Pi/(mg prot·h),显著高于后肠的(0.62±0.18) μmol Pi/(mg prot·h)。研究表明,中华绒螯蟹肠道黏膜下层是AchE和NOS阳性神经元分布的部位,两种神经元递质含量和Na+,K+-ATP酶活性在中肠和后肠间存在显著差异。

    • 苯并[a]芘、菲在缢蛏体内的生物富集与释放

      2015, 39(7):998-1004. DOI: 10.11964/jfc.20141209603

      摘要 (2896) HTML (0) PDF 1.23 M (2272) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了研究苯并[a]芘(Bap)、菲PHE在缢蛏体内的富集及释放过程的动力学特征,通过双箱动力学模型对富集(15 d)与释放(9 d)过程进行非线性曲线拟合,获得缢蛏对BaP、PHE的吸收速率常数k1、释放速率常数k2、生物富集因子BCF、平衡状态下生物体内BaP含量CAmax、生物学半衰期B1/2。结果显示,缢蛏对BaP的富集能力高于PHE,BaP增加幅度分别为0.45 ng/(kg·d)(40 μg/L实验组)、0.33 ng/(kg·d)(20 μg/L实验组)、0.23 ng/(kg·d)(10 μg/L实验组);PHE增加幅度分别为0.33 ng/(kg·d)(30 μg/L实验组)、0.25 ng/(kg·d)(20 μg/L实验组)、0.18 ng/(kg·d)(10 μg/L实验组)。BaP、PHE的富集、清水释放均为前期迅速,后期缓慢。缢蛏对BaP、PHE的k1范围分别为0.39~0.52,0.30~0.43,平均值分别为0.44和0.36,均随BaP、PHE暴露浓度的增大而减少;k2范围分别为0.001 6~0.001 7,0.002 8~0.003 3,平均值分别为0.001 6和0.003 0,无明显的变化趋势;BCF范围分别为243.96~306.28,105.73~130.85,平均值分别为268.18和118.57,均随BaP、PHE暴露浓度的增大而减少;CAmax范围分别为3 062.76~9 758.25 μg/kg,1 308.54~3 171.84 μg/kg,平均值分别为5 969.08和2 287.71 μg/kg;B1/2范围分别为407.73~433.22 d,210.68~248.06 d,平均值分别为421.20和232.04 d,均随BaP、PHE暴露浓度的增大而增大。

    • 三种主养草鱼池塘沉积物-水界面碳通量的研究

      2015, 39(7):1005-1014. DOI: 10.11964/jfc.20140909454

      摘要 (2883) HTML (0) PDF 1.31 M (2365) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了探讨环境因子和底栖配养生物对碳通量的影响,采用实验室培养方法,测定并比较了不同混养模式下沉积物-水界面各形态碳的通量,监测了8月沉积物-水界面上覆水中各形态碳含量的昼夜变化。3种主养草鱼池塘的养殖模式为草鱼、鲢和鳙混养(GSB),草鱼、鲢、鳙和凡纳滨对虾混养(GSBL),草鱼、鲢、鳙和鲤混养(GSBC)。主要实验结果如下:(1)在养殖周期内,3种混养模式沉积物-水界面可溶性无机碳(DIC)通量范围为0.65~16.90 mg/(m2·d),可溶性有机碳(DOC)通量范围为0.16~13.49 mg/(m2·d),颗粒性有机碳(POC)通量范围为-2.29~3.32 mg/(m2·d);GSB和GSBC模式各形态碳通量均以8月最高,GSBL模式则以7月最高。(2)在养殖周期内,3种混养模式沉积物对DIC和DOC均表现为释放,而对POC在4-6月以吸收为主,其余时间表现为释放。(3)在养殖的中后期,3种混养模式的DIC、DOC和POC通量存在一定差异。其中,GSBL和GSBC模式中各形态碳通量值显著高于GSB模式(P<0.05)。(4)8月上覆水中DIC和DOC的含量在4:00达到最大值,POC含量则表现为GSBL模式在4:00达到最大值,12:00达到最小值,而GSBC模式在4:00达到最小值,12:00达到最大值。(5)各形态碳通量的变化与上覆水中的DO、pH呈显著负相关关系,而与水温呈显著正相关关系。

    • 黄颡鱼幼鱼植物性蛋白饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠合适水平的研究

      2015, 39(7):1015-1023. DOI: 10.11964/jfc.20150209761

      摘要 (2957) HTML (0) PDF 1.03 M (2440) 评论 (0) 收藏

      摘要:本实验探究黄颡鱼幼鱼植物性蛋白基础饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠的合适水平。共设置7个处理组:阳性对照组DP(只添加NaH2PO4 20 g/kg)和阴性对照组DN(不添加柠檬酸和NaH2PO4);实验组D0(柠檬酸2 g/kg+NaH2PO4 20 g/kg)、D25(柠檬酸2 g/kg+NaH2PO4 15 g/kg)、D50(柠檬酸2 g/kg+NaH2PO4 10 g/kg)、D75(柠檬酸2 g/kg+NaH2PO4 5 g/kg)、D100(柠檬酸2 g/kg)。实验组中柠檬酸替代NaH2PO4的比例分别为0%、25%、50%、75%和100%,分别饲养初始规格为(3.5±0.1)g的黄颡鱼,每个处理组3口缸,每缸50尾,投喂8周。实验结束后,对鱼体生长性能、营养物质的表观消化率、全鱼营养成分、脊椎骨元素含量、抗氧化性能等指标进行分析。结果显示:(1)饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠实验组与阴性对照组相比,显著提高了黄颡鱼的末体质量、增重率、特定生长率,降低了饵料系数,但与阳性对照组相比差异不显著。替代比例为0%~50%时,生长表现最好;(2)实验组中柠檬酸替代磷酸二氢钠与阴性对照组相比,显著提高了干物质、蛋白质以及磷的表观消化率,降低了粪便N和P的含量,与阳性对照组相比差异不显著,且替代比例越高,粪便中N和P含量越低;(3)实验组中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠对全鱼水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分含量无影响(P>0.05);但与阴性对照组相比显著提高鱼体Ca、Mg、P、Cu的储积量(P<0.05),且随着替代水平的增加呈降低趋势,在0%~75% 替代水平储积量最高;脊椎骨各元素含量与阴性对照组相比有所提高,但在替代组与对照组间无显著性差异;(4)柠檬酸替代无机磷在25%~75% 水平与阴性对照组相比,显著增强了过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶的活性,但对丙二醛、免疫球蛋白M、血磷和血钙的含量无影响。综上所述,为保证鱼体正常生长,减少养殖环境污染,降低饲料成本,在当前基础配方下,黄颡鱼饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠的水平可为25%~50%。

    • 饲料中有效磷对吉富罗非鱼生长、体组成及生化指标的影响

      2015, 39(7):1024-1033. DOI: 10.11964/jfc.20150209722

      摘要 (3301) HTML (0) PDF 1.24 M (2489) 评论 (0) 收藏

      摘要:为探讨饲料中不同有效磷水平对吉富罗非鱼幼鱼生长、体组成及生化指标的影响,以磷酸二氢钙(MCP)为磷源,配制含有效磷(AP)水平分别为0.52%(对照组)、0.61%、0.70%、0.78%、0.87%、0.96%和1.05%的7种等氮等能实用饲料,饲喂初始均重为(29.40±0.15)g的实验鱼。每种饲料设置3个重复,每个重复放25尾鱼,进行56 d的养殖实验。结果表明:饲料AP水平对罗非鱼的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、饲料系数(FCR)和脏体比(VSI)均有显著影响(P<0.05)。以WGR为评价指标,通过二次回归分析得出,罗非鱼饲料的适宜AP水平为0.80%。随饲料AP水平的增加,罗非鱼全鱼总磷和灰分含量显著增加并达到稳定(P<0.05),而全鱼水分含量差异不显著(P>0.05),全鱼和肠系膜、肝脏组织脂肪含量均显著下降(P<0.05)。用折线模型分析全鱼磷和灰分含量,得出罗非鱼幼鱼对饲料AP的需求量分别为0.81%和0.80%。随饲料AP水平的增加,肝脏苹果酸脱氢酶(MDH)、丙酮酸激酶(PK)、脂蛋白脂酶(LPL)和肝酯酶(HL)活性均显著增加(P<0.05)。血清谷丙转氨酶(GPT)活性显著下降(P<0.05),而碱性磷酸酶(AKP)活性显著上升(P<0.05),血清超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先升后降趋势,在0.78%水平组达到最大值,而肝脏丙二醛(MDA)含量正好相反,在0.78%水平组最低。综上所述,研究结果表明:吉富罗非鱼(30~150 g)实用饲料的最适有效磷水平为0.80%。

    • 虎斑乌贼受精卵卵黄营养成分分析

      2015, 39(7):1034-1042. DOI: 10.11964/jfc.20150409810

      摘要 (2913) HTML (0) PDF 5.65 M (2061) 评论 (0) 收藏

      摘要:本实验对虎斑乌贼受精卵卵黄的营养成分进行分析,旨在探讨其幼体的营养需求量,为其幼体配合饲料研制提供参考数据。随机选取大约800个虎斑乌贼受精卵的卵黄,采用国家标准方法测定其水分、灰分、粗蛋白质、粗脂肪、氨基酸、脂肪酸和矿物元素含量。结果表明:1)虎斑乌贼受精卵卵黄中粗蛋白质含量为76.33%(干重基础);总氨基酸(TAA)和必需氨基酸(EAA)含量分别为71.22%和32.38%(干重基础),EAA/TAA为45.46%,氨基酸中以谷氨酸(Glu)含量最高(9.97%),必需氨基酸中亮氨酸(Leu)含量最高(7.58%)。2)其粗脂肪含量12.71%(干重基础);共检出17种脂肪酸,包括8种饱和脂肪酸(SFA)、5种单不饱和脂肪酸(MUFA)和4种多不饱和脂肪酸(PUFA),SFA、MUFA和PUFA分别占脂肪酸总量的43.47%、7.54%和49.25%,其中以DHA含量最高,达32.80%,EPA含量为7.70%,DHA/EPA为4.26。3)检测出Na、K、Ca、Mg、Sr、Mn、Fe、Cu、Zn、Al和As 矿物元素,微量元素中富含Zn、Al和Fe,含量分别为 0.77、0.71和0.43 mg/kg(鲜重基础)。由此可见,卵黄具有高蛋白、低脂肪,富含n-3PUFA的特点;虎斑乌贼幼体饲料中蛋白质需求量参考值为76.33%;氨基酸需求量参考值,如赖氨酸(Lys)为5.49%,蛋氨酸(Met)为2.63%;脂肪的需求量参考值为12.71%,DHA为4.17%,EPA为0.98%;微量元素需求量参考值,如Zn为2.77 mg/kg,Cu为0.19 mg/kg(干重基础)。

    • 美洲鳗鲡及其养殖水体分离耐药菌的多样性和耐药性分析

      2015, 39(7):1043-1053. DOI: 10.11964/jfc.20150309747

      摘要 (2878) HTML (0) PDF 1.93 M (2767) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了更有针对性地防控水产动物细菌性病害的发生和流行,本实验对美洲鳗鲡及其养殖水体耐药细菌的种属特征及耐药情况开展了相关研究。首先采集美洲鳗鲡不同部位(表皮、鳃、肠道)及其养殖水体的样品,经5种抗菌药物平板筛选耐药菌株,然后采用K-B纸片扩散法检测细菌对抗菌药物的耐药性,同时测定耐药菌株的16S rDNA序列,进而分析耐药菌的种属分布和多重耐药性。结果显示,经耐药平板筛选分离纯化得到108株细菌,分别属于气单胞菌属、柠檬酸杆菌属、不动杆菌属等20个属;其中,93.5%的菌株对3种(含)以上的抗菌药物具有耐药性,86.1%的菌株对3类(含)以上的药物具有抗性。对阿莫西林的耐药率高达90.7%,对四环素、利福平以及磺胺类和酰胺醇类药物类的耐药率为60%~80%,对头孢噻肟、新霉素以及喹诺酮类的耐药性弱(低于20%)。美洲鳗鲡肠道(0.40)、表皮(0.41)、鳃部(0.42)及水样(0.47)菌群的多重耐药指数显示各生态样品耐药程度较为严重,尤以水样为最。各菌属中,柠檬酸杆菌属(0.58)和克雷伯菌属(0.61)的多重耐药指数最高,而不动杆菌属(0.21)则相对较低。美洲鳗鲡及养殖水体普遍存在多重耐药菌株,对此应引起足够的重视;水产动物及养殖环境耐药细菌对某些水产用药如诺氟沙星、新霉素等耐药率低,可将其做为水产动物细菌性疾病治疗的首选药物。

    • 中华鳖脾肾性水肿病病理学诊断

      2015, 39(7):1054-1061. DOI: 10.11964/jfc.20150209735

      摘要 (3409) HTML (0) PDF 45.92 M (1716) 评论 (0) 收藏

      摘要:为探究中华鳖水肿病发病机制和发病规律,确定该病临床诊断标准,实验从若干自然发病的疑似中华鳖脾肾性水肿病的病鳖中,选取7只具有典型临床症状的病鳖,解剖并对内脏器官组织制作石蜡切片、H.E.染色后观察。结果表明:病鳖体表无病伤,不吃食,水肿症状表现不同,两只病鳖生殖器外露,全部病鳖口咽腔充血和炎症明显、黏液较少,时有口鼻出血,肝脏淤血,胃肠壁水肿和充血。病鳖脾组织髓质部红细胞数量大增和淋巴细胞聚集,并出现弥漫性坏死区域,嗜酸性粒细胞浸润,以此作出脾性水肿的病理诊断。病鳖的肾组织间质和肾小球充血,嗜酸性粒细胞浸润,远曲小管和近曲小管颗粒变性、空泡变性,肾小球坏死,近曲小管细胞坏死,以此作出肾性水肿的病理诊断。口咽腔绒毛黏膜血管扩张、充血,口腔黏膜上皮杯状细胞紧密分布,黏膜下层淋巴细胞增多,黏膜毛细血管破裂,有大量血细胞渗出,部分黏膜上皮脱落,绒毛间渗出大量坏死红细胞,嗜酸性粒细胞浸润。可以诊断口咽腔组织病理变化与该病关系密切。其他组织病变不严重。研究结果还表明中华鳖没有类似高等动物的唾液腺和腮腺,对中华鳖肿脖子病、腮(鳃)腺炎的命名提出异议,应该停止使用。

    • 海参内脏胶原降解酶的纯化及性质研究

      2015, 39(7):1062-1070. DOI: 10.11964/jfc.20150209734

      摘要 (2681) HTML (0) PDF 6.36 M (1952) 评论 (0) 收藏

      摘要:针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析、Phenyl Sepharose FF疏水柱层析及Mini Q离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30 ℃,最适pH为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA完全抑制,亦可被PMSF、Pefabloc SC等丝氨酸蛋白酶抑制剂完全抑制。底物特异性表明,该酶只对金属蛋白酶荧光底物有分解作用,推测其为金属蛋白酶。该酶在4和37 ℃下均能有效地分解海参体壁胶原蛋白,表明其在海参自溶过程中起重要作用。

    • 蛋白水解肽-Fe2+配合物对克氏原螯虾体内Cd2+的脱除效果

      2015, 39(7):1071-1078. DOI: 10.11964/jfc.20141009675

      摘要 (2676) HTML (0) PDF 1.07 M (2221) 评论 (0) 收藏

      摘要:为探讨克氏原螯虾体内重金属Cd2+残留的脱除方法,采用基础饲料中添加制备的蛋白水解肽-Fe2+配合物(TPH-Fe2+)进行饲喂,检测螯虾不同组织器官中Cd2+含量变化情况。结果显示,染毒后螯虾不同器官中Cd2+富集量依次为内脏团>肠>鳃>腹部肌肉>螯足肌肉,且在0~12 d自然净化过程中,无显著性下降趋势。添加400、800和1 200 mg/kg TPH-Fe2+饲喂螯虾,内脏团、鳃、肠及腹部肌肉中Cd2+含量均有不同程度下降;饲喂12 d后,螯虾不同器官中Cd2+脱除率为肠>内脏团>鳃>腹部肌肉,脱除率分别为40.60%、36.13%、33.36%和10.15%;TPH-Fe2+对螯虾螯足肌肉中Cd2+含量无显著性影响。研究表明,蛋白水解肽-Fe2+配合物能有效脱除螯虾体内Cd2+残留,可作为一种螯虾养殖饲料添加剂在基础饲料中加以应用。

    • >综述
    • 脂肪酸对鱼类免疫系统的影响及调控机制研究进展

      2015, 39(7):1079-1088. DOI: 10.11964/jfc.20150109647

      摘要 (2584) HTML (0) PDF 1.22 M (3248) 评论 (0) 收藏

      摘要:替代脂肪源的开发和利用是解决鱼油短缺问题的必然选择。然而,随着替代水平的提高,鱼体常常表现免疫水平和抗病能力降低。鱼油替代的本质为脂肪酸替代,深入研究脂肪酸与鱼类免疫的关系显得尤为重要。本实验综述了脂肪酸对鱼类免疫性能的影响及调控机制。饱和脂肪酸会降低鱼类免疫力,而适量添加n-3长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)、共轭亚油酸(CLA)或提高n-3/n-6多不饱和脂肪酸(PUFA)的比例有利于鱼体免疫力发挥;饲料中脂肪酸主要通过细胞膜结构、信号传导、类花生四烯酸、细胞因子和类固醇激素等途径对鱼类免疫进行调控。脂肪酸与鱼类的免疫性能具有高度相关性,而调控机制的研究尚有较大空间。未来研究应该侧重于以下几个方面:脂肪酸对免疫相关转录因子的调控机制;鱼类肠道脂肪酸组成改变与菌群结构和免疫性能之间的相关性;环境因子对鱼体脂肪代谢和免疫力的影响;非脂肪酸成分(矿物质、维生素)对鱼类脂肪酸代谢和免疫过程的调控机制。

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