大口黑鲈(Micropterus salmoides)是我国重要的经济养殖鱼类，近年来年产量超过30万t。目前，我国大口黑鲈的养殖仍以冰鲜杂鱼为主，这无疑会造成资源浪费和对养殖环境的污染，同时还会引起各种疾病的暴发。现有的资料已涉及大口黑鲈的营养学研究，包括蛋白质^[1-3]、脂肪^[4-6]、和碳水化合物^[7]，但其营养和饲料参数仍然十分缺乏，导致其生产力水平低下，尤其是在中后期出现生长慢、厌食、肝脏疾病等问题。研究表明，珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀ $\times$ E. lanceolatus♂ )^[8]对天然饵料和配合饲料的利用差异，为其人工配合饲料的优化提供了依据。同时，也阐明了大口黑鲈^[9]对外源性脂肪的适应和调节能力。这些研究结果可以为养殖鱼类人工配合饲料的研发提供借鉴和技术指导。因此，充分了解大口黑鲈的营养需求特点，是科学合理配制其人工饲料的前提。为此，本实验旨在通过比较研究配合饲料和冰鲜鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肉对大口黑鲈生长、血液生化指标以及肝脏和肠道组织学的差异影响，为大口黑鲈配合饲料的开发提供理论依据和新思路。

实验用冰鲜杂鱼为鲜活鲢，购自重庆北碚区天生农贸市场，用绞肉机粉碎，于–20 °C冰箱中保存备用。配合饲料为大口黑鲈专用商品配合饲料(购自国内某知名品牌)。实验饲料的营养组成见表1。

表 1(Tab.1)

表 1 配合饲料和冰鲜鲢的主要营养组成 Tab.1 The main nutritional components of formulateddiet and fresh frozen H. molitrix(dry matter) 营养成分 nutritional component 配合饲料 formulated diet 冰鲜鲢 fresh frozen H. molitrix 水分 moisture 4.65 68.25 粗蛋白质 crude protein 52.65 56.21 粗脂肪 crude lipid 11.00 32.74 粗灰分 crude ash 8.51 9.69 淀粉 starch content 12.6 –

表 1 配合饲料和冰鲜鲢的主要营养组成 Tab.1 The main nutritional components of formulateddiet and fresh frozen H. molitrix(dry matter)

实验用大口黑鲈购自重庆市长寿区鱼种场，用配合饲料饲喂实验鱼10 d以适应实验环境。实验前禁食24 h后，随机挑选出体格健壮、规格一致的大口黑鲈[(12.45±0.07) g]分为2组，每组设3个重复，每个重复30尾。每天表观饱食投饲配合饲料和冰鲜鲢3次(8:30、12:30和18:00)，持续摄食约30 min，随后清除残饵和粪便，养殖水源为曝气自来水，在室内淡水循环养殖系统(有效容积200 L)饲养84 d。实验期间，水温为26~29 °C，溶解氧7~8 mg/L，氨氮<0.48 mg/L，亚硝酸盐氮<0.07 mg/L，pH为7.2~7.6。

饲养实验结束后，禁食24 h后称重，每个重复随机取3尾鱼作为全鱼样品，用于体组成的测定；每个重复随机取6尾鱼，用0.01%Ms-222麻醉，测体长、体高，分离出内脏、肝胰脏，用于形体指标的测定；每个重复随机取5尾鱼于尾静脉取血，加入抗凝剂的血液于4 000 r/min、4 °C条件下离心10 min，收集血浆，–80 °C保存备用。每个重复取3条鱼的肠将其分为3段(前肠、中肠和后肠)和肝脏保存于PBS缓冲液中，液氮速冻后–20 °C保存备用。

参照吴仁协等^[10]的方法剪取实验鱼的肝脏和肠部并匀浆。样品中加入2.5 mL冰冷双蒸水，用电动匀浆器在冰水浴中1 000 r/min匀浆5 min，匀浆液在4 °C，1 000 r/min，离心30 min，取上清液，–80 °C保存备用。

饲料和鱼体常规营养测定均采用国标法。其中粗蛋白含量检测采用蛋白质测定仪检测(Leco FB-528)；粗脂肪含量检测采用索氏抽提法；水分含量检测采用在105 °C烘干至恒重法；灰分检测采用马弗炉550 °C灼烧失重法测定。

蛋白酶和淀粉酶活性采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定。蛋白酶定义为在37 °C下，每毫升酶液每分钟水解酪蛋白生成1 μg酪氨酸为一个酶活力单位。淀粉酶定义为在37 °C下，每毫升酶液30 min内完全水解10 mg淀粉为一个淀粉酶活力。

血浆中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性以及总蛋白(TP)、尿素(UREA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和葡萄糖(GLU)含量采用全自动生化分析仪(日立7100)测定。血浆超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量的测定采用上海优选生物科技有限责任公司的试剂盒进行测定。血浆胰岛素委托第三军医大学直接采用放射免疫法测定(放射免疫技术仪：磁酶联免疫测定仪，北京倍爱康生物技术有限责任公司)，试剂盒由北京北方生物技术所生产。肝糖原、肌糖原采用蒽酮法测定，试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。

增重率(weight growth rate, WGR, %)＝(W_t–W_o)/W_o×100；

特定生长率(specific growth rate, SGR, %/d)＝(lnW_t–lnW_o)/t×100；

蛋白质效率(protein efficiency rate, PER, %)＝(W_t–W_o)/(W_f×W_p)×100；

饲料系数(feed conversion rate, FCR)＝W_f/(W_t–W_o)；

成活率(survival rate, SR, %)=N_t/N_o×100；

肥满度(condition factor, CF, g/cm³)＝W_t/L³×100；

脏体比(viscerosomatic index, VSI, %)＝W_v/W×100；

肝体比(hepatosomatic index, HSI, %)＝W_h/W×100。

式中，t为饲养天数(d)；N_o为初始尾数(尾)；N_t为终末尾数(尾)；W_P为饲料的粗蛋白质含量(%)；W_f为总摄食饲料的干重(g)；W_t为终末均重(g)；W_o为初始均重(g)；W_v内脏重(g)；W_h肝脏重(g)；W为体质量(g)；L为体长(cm)。

用SPSS 23.0软件对所得数据进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)，若差异显著(P<0.05)，再进行Tukey氏多重比较。除成活率外，数据均以平均值±标准误(mean±SE)表示。

配合饲料和冰鲜鲢会显著影响大口黑鲈的生长性能(表2)。配合饲料组大口黑鲈的FBW、WGR、SGR和FCR显著低于冰鲜鲢组(P<0.05)，而PER、HSI、VSI以及肝糖原含量显著高于冰鲜鲢组(P<0.05)(表2, 表3)。各实验组大口黑鲈肥满度以及全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和肌糖原含量均无显著差异(P>0.05)。各实验组大口黑鲈成活率为100%。

表 2(Tab.2)

表 2 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈生长性能的影响 Tab.2 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on the growth performance of M. salmoides 项目 items 配合饲料 formulated diet 冰鲜鲢 fresh frozen H. molitrix 初始重/g IBW 12.45±0.07 12.56±0.14 终末重/g FBW 53.50±4.24a 76.68±7.17b 增重率/% WGR 329.72±0.37a 510.51±0.61b 特定生长率/(%/d) SGR 1.60±0.99a 1.99±0.11b 蛋白质效率/% PER 1.44±0.26b 0.67±0.08a 饲料系数 FCR 1.20±0.06a 3.60±0.35b 成活率/% SR 100 100 注：同行中上标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，下同 Notes: values in the same column with different superscripted small letters mean significant difference (P<0.05), the same below

表 2 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈生长性能的影响 Tab.2 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on the growth performance of M. salmoides

表 3(Tab.3)

表 3 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈形态指标和营养组成的影响 Tab.3 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on morphological measurements and nutrition composition of M.salmoides 项目 items 配合饲料 formulated diet 冰鲜鲢 fresh frozen H. molitrix 形态指标　morphological measurements 肥满度/(g/cm3) CF 1.77±0.13 2.24±0.20 脏体比/% VSI 8.60±0.11a 6.67±0.51b 肝体比/% HSI 2.67±0.17a 1.08±0.07b 营养组成　nutrition composition 水分/% moisture 72.00±0.01 68.00±0.04 粗蛋白质/% crude protein 18.01±0.28 17.93±4.77 粗脂肪/% crude lipid 6.78±0.21 6.37±0.04 粗灰分/% crude ash 3.44±0.05 3.51±0.01 肝糖原/(mg/g) liver glycogen 74.33±8.97b 42.77±0.95a 肌糖原/(mg/g) muscle glycogen 1.02±0.06 0.91±0.08

表 3 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈形态指标和营养组成的影响 Tab.3 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on morphological measurements and nutrition composition of M.salmoides

配合饲料组大口黑鲈肝脏蛋白酶活性显著低于冰鲜鲢组(P<0.05)，而肠淀粉酶活性无显著差异(表4)。

表 4(Tab.4)

表 4 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈消化酶活性的影响 Tab.4 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on enzyme activities of M. salmoides 项目 items 配合饲料 formulated diet 冰鲜鲢 fresh frozen H. molitrix 肝脏蛋白酶/(U/mg protein) liver protease 0.53±0.30a 0.72±0.07b 肠淀粉酶/(U/mg protein) intestinal amylase 0.76±0.21 0.79±0.02

表 4 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈消化酶活性的影响 Tab.4 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on enzyme activities of M. salmoides

配合饲料和冰鲜鲢会显著影响大口黑鲈的血浆生化指标(表5)。配合饲料组大口黑鲈血浆的 AST活性、血糖含量以及Ca/P比值显著高于冰鲜鲢组(P<0.05)，而其血浆ALP活性以及TP、TG、尿素、钙和磷含量显著低于冰鲜鲢组(P<0.05)。各实验组血浆ALT活性以及胆固醇和胰岛素含量均无显著差异(P>0.05)。

表 5(Tab.5)

表 5 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈血浆生化指标的影响 Tab.5 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on plasma biochemical index of M. salmoides 项目 items 配合饲料 formulated diet 冰鲜鲢 fresh frozen H. molitrix 谷丙转氨酶/(U/L) ALT 5.97±1.51 5.05±1.20 谷草转氨酶/(U/L) AST 53.05±3.89b 32.60±2.20a 碱性磷酸酶/(U/L) ALP 69.23±1.52a 109.42±11.35b 总蛋白/(g/L) TP 38.40±1.80a 50.05±2.50b 甘油三脂/(mmol/L) TG 8.20±0.66a 17.35±1.29b 总胆固醇/(mmol/L) TC 15.06±0.77 14.50±1.02 血糖/(mmol/L) plasma glucose 4.71±0.63b 3.30±0.28a 胰岛素/(mmol/L) plasma insulin 26.65±2.78 22.22±1.40 尿素/(mmol/L) UREA 1.23±0.12a 2.58±0.64b Ca/(mmol/L) 3.03±0.26a 3.47±0.02b P/(mmol/L) 3.18±0.24a 4.42±0.16b Ca/P 0.95±0.02b 0.79±0.03a

表 5 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈血浆生化指标的影响 Tab.5 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on plasma biochemical index of M. salmoides

配合饲料组，大口黑鲈血浆SOD和GSH-Px活性显著低于冰鲜鲢组(P<0.05)。而配合饲料组血浆MDA含量显著高于冰鲜鲢组(P<0.05)。各实验组血浆CAT活性以及GSH-Px/SOD和CAT/SOD比值均无显著差异(P>0.05)(表6)。

表 6(Tab.6)

表 6 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈血浆抗氧化指标的影响 Tab.6 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on plasma antioxidant index of M. salmoides 项目 items 配合饲料 formulated diet 冰鲜鲢 fresh frozen H. molitrix 超氧化物歧化酶/ (U/mg prot) SOD 362.95±13.80a 432.95±8.27b 过氧化氢酶/ (U/mg prot)CAT 108.85±7.99 123.20±8.91 谷胱甘肽过氧化物酶/ (nmol/L) GSH-Px 530.45±63.71a 609.05±53.67b GSH-Px/SOD 1.46±0.30 1.40±0.15 CAT/SOD 0.28±0.01 0.29±0.02 丙二醛/(nmol/L) MDA 31.25±2.05b 28.20±0.14a

表 6 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈血浆抗氧化指标的影响 Tab.6 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on plasma antioxidant index of M. salmoides

冰鲜鲢组大口黑鲈肝细胞排列整齐，细胞界限较为明显，细胞核清晰可见。而配合饲料组肝细胞形态轮廓模糊，肝细胞空泡化较为严重，脂肪堆积加重，肝细胞核逐渐溶解或缺失(图1)。

配合饲料组大口黑鲈的前肠绒毛稀疏、较短，而冰鲜鲢组前肠绒毛纤长紧密、排列整齐。配合饲料组中肠绒毛稀疏、较短、空泡化严重，杯状细胞数量明显减少且排列不整齐，而冰鲜鲢组中肠绒毛高度和宽度较配合饲料组有所增加，肠绒毛空泡现象明显较少(图2)。

图 1(Fig. 1)

图 1 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈肝组织的影响(H. E 400×) G-cell：肝细胞；G-nucleus：肝细胞核；F-granule：肝细胞中堆积的脂肪粒；1：冰鲜鲢组；2：配合饲料组 Fig. 1 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on liver histology of M. salmoides (H. E 400×) G-cell: hepatocytes; G-nucleus: hepatic nuclear; F-granule: fat granule; 1: fresh frozen H. molitrix; 2: formulated diet

图 2(Fig. 2)

图 2 配合饲料和冰鲜鲢对大口黑鲈前肠和中肠组织结构的影响(H. E，100×) (a) 配合饲料组前肠；(b) 冰鲜鲢组前肠；(c) 配合饲料组中肠；(d) 冰鲜鲢组中肠 Fig. 2 Effects of formulated diet and fresh frozen H. molitrix on foregut and migut in M. salmoides under a light microscope (H. E, 100×) (a) formulated diet of foregut; (b) fresh frozen H. molitrix of foregut; (c) formulated diet of midgut; (d) fresh frozen H. molitrix of midgut

本研究结果显示，摄食冰鲜鲢的大口黑鲈WGR和SGR显著高于配合饲料组，且终末重提高了43%，说明配合饲料不利于改善大口黑鲈的生长。这与在珍珠龙胆石斑鱼^[8]和大菱鲆(Scophthalmus maximus)^[11]上的研究结果一致。这些结果显示，肉食性养殖鱼类对冰鲜杂鱼的利用效果优于配合饲料，说明配合饲料的营养特性还不能适应肉食性鱼类的快速生长。但是冰鲜鲢组大口黑鲈的PER显著低于配合饲料组，表明饲喂冰鲜鲢会造成饲料蛋白质资源的浪费。本实验还发现，大口黑鲈摄食配合饲料，肝脏组织结构受到明显破坏，致使肝脏消化酶的分泌能力降低，肝脏蛋白酶活性显著降低，从而导致大口黑鲈的生长受到抑制。此外，大口黑鲈摄食配合饲料后，肠道绒毛和杯状细胞数量减少，进一步证实了配合饲料会影响大口黑鲈对营养物质的吸收能力。这些研究表明，配合饲料抑制大口黑鲈生长的原因可能是消化吸收功能降低所致。因此，应结合冰鲜杂鱼营养成分特点及其对大口黑鲈生长的良好效果，调整和优化大口黑鲈的饲料配制技术，保障其健康养殖。今后的研究，我们应该关注大口黑鲈肝脏和肠道的健康。

研究表明，动物对饲料组成会产生生理适应性反应，饲料中淀粉含量会诱导养殖动物淀粉酶活性的变化。本实验大口黑鲈摄食配合饲料后肠道淀粉酶活性却无显著变化，尽管配合饲料的淀粉含量高于冰鲜鲢，而肝糖原含量和HSI显著升高。这与之前在大口黑鲈上的研究结果一致^[12]，随着饲料碳水化合物水平降低，大口黑鲈HSI呈下降趋势，说明大口黑鲈耐受糖的能力较差。已有研究也证实，虹鳟(Oncorhynchus mykiss)^[13]和斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)^[14]摄食高糖饲料后，会使脂肪在肝脏沉积、HSI增大进而对肝脏造成损伤。这表明肉食性鱼类对碳水化合物的利用率很低，长期摄食高碳水化合物水平饲料会导致鱼肝脏体积增大。但大口黑鲈摄食高碳水化合物饲料后，肝脏脂肪含量是否会升高，有待深入研究。

鱼类血液生理生化指标与饲料营养水平密切相关，因此，血液生理生化指标的变化可以反映机体的代谢、营养和生理状况。正常状态下，机体血液中ALT和AST活性较低，只有当组织细胞发生破坏和损害时，才会引起血液内转氨酶活性增强。本研究发现，大口黑鲈投喂商品配合饲料后血浆中AST中活性升高，说明投喂配合饲料对大口黑鲈的肝脏产生了一定的损伤，这反映了大口黑鲈对配合饲料的生理适应能力较差。此外，肝脏受损后，进一步影响了TG转运，导致配合饲料组大口黑鲈血浆中TG降低，相似结果在草鱼(Ctenopharyngodon idella)^[15]、吉富罗非鱼(GIFT Oreochromis niloticus)^[16]和大菱鲆^[17]上均有报道。当鱼类肝脏出现损伤后，LDL-C活性变低，数量也因此减少，影响了碳水化合物的代谢和酯化，进而导致大口黑鲈长期摄食配合饲料后肝糖原含量增加。胰岛素是调节和维持血糖平衡最为重要的调节因子，目前有关胰岛素的分泌与饲料中糖含量关系的报道结果不一致^[18-20]。本实验发现，碳水化合物水平对大口黑鲈血浆胰岛素含量无显著影响，表明鱼类胰岛素的分泌与饲料碳水化合物水平无关，对血液葡萄糖含量的调节主要依赖肝糖原途径。与在军曹鱼(Rachycentron canadum)^[21]上的研究结果一致。有关大口黑鲈糖代谢的研究值得深入探讨。

ALP是一种多功能酶，在机体内直接参与磷酸基团的转移和代谢，其活性高低是衡量磷代谢强度的指标，ALP也是溶酶体酶的重要组成成分，在鱼体的免疫中发挥着重要作用^[22]。有研究表明，鱼体内磷缺乏会导致ALP活性降低^[23]。本实验发现，大口黑鲈投喂冰鲜鲢后血浆中磷含量增加，进而导致血浆ALP活性升高，说明投喂冰鲜鲢可以提高大口黑鲈机体的免疫能力，这可能是ALP活性升高的原因。血浆磷含量增加，使鱼体物质代谢过程中的磷酸化作用加强，葡萄糖异生作用减弱，这也是大口黑鲈摄食冰鲜鲢后生长速度快于配合饲料的原因。但大口黑鲈摄食配合饲料和冰鲜鲢后，血浆钙、磷含量出现较大差异，而Ca/P比值保持稳定，这是本研究的一个意外发现，其中原因值得深入探究。

动物在病理或应激状态下可产生大量自由基，与不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，形成脂质过氧化产物如丙二醛(malondialdehyde, MDA)，从而对鱼体产生毒害作用^[24-25]。本研究中大口黑鲈摄食配合饲料显著提高了肝脏MDA含量，表明肝脏发生了脂质过氧化反应。这与胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)^[26]和尼罗罗非鱼(O. niloticus)^[27]上的研究结果一致。动物体内过氧化物含量增加，继而会影响肝功能。此外，实验中大口黑鲈摄食配合饲料后，血浆SOD和GSH-Px活性显著降低，这表明配合饲料引起鱼体MDA含量增加的同时，鱼体内抗氧化防御系统也受到危害，进而导致机体清除自由基的能力减弱。血浆AST活性升高，更进一步证实了配合饲料对大口黑鲈肝脏造成明显的伤害。

综上所述，投喂冰鲜鲢可提高大口黑鲈的生长性能，但其饲料效率却远低于配合饲料。而配合饲料通过影响大口黑鲈的消化道健康、机体糖脂代谢和抗氧化能力，进而抑制机体的生长。因此，可以借鉴冰鲜鲢的营养组成和大口黑鲈的代谢特性，深入研发大口黑鲈的饲料配制技术，促进其产业健康发展。